Разработка и исследование вагинальных лекарственных форм с рекомбинантными белками теплового шока для стимуляции гуморальных реакций иммунитета, применяемых для лечения рака шейки матки

• Автор: Ульянов, Андрей Михайлович
• Шифр специальности: 14.04.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 150 с. : 1 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Содержание

Список сокращений

Введение

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Рак шейки матки

1.2.Принципы лечения генитального папилломатоза

1.3.Факторы местного иммунитета женской половой системы

1.4. Строение вируса папилломы человека. Механизм канцерогенеза

1.5. Белки теплового шока и их роль в иммунитете

1.5.1. Белки теплового шока и процессинг антигенов

1.6. Хитозан. Применение хитозана в медицинской и фармацевтической практике
1.7. Интравагинальные лекарственные формы
1.7.1. Вагинальные суппозитории
1.7.1.1. Влияние лекарственной формы препарата и путей введения
в организм на эффективность
1.7.1.2. Характеристика суппозиторных основ
1.7.1.3. Биофармацевтические исследования суппозиториев
1.7.1.4. Теоретическое обоснование выбора суппозиторной основы
1.7.1.5. Гидрофобные основы
1.7.1.6. Гидрофильные основы
1.7.1.7. Дифильные основы
1.7.2. Вагинальные мягкие желатиновые капсулы
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1 Методы идентификации и количественного определения композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70M.tub. и pE7/18-Hsp
70M.tub. в субстанции и лекарственных формах
2.2.1.1. ДСН -эпейрофорез в полиакриламидном геле
2.2.1.2. Вестерн-блот анализ
2.2.1.3. Спектрофотометрическое определение рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. с применением бицинхони-новой кислоты
2.2.2. Рентгеноструктурный анализ
2.2.3. Методы определения физико-химических и структурномеханических свойств суппозиториев
2.2.4. Методы определения физико-химических и структурномеханических свойств мягких желатиновые капсул
2.2.5. Микробиологические методы исследования суппозиториев
2.2.6. Фармакокинетические методики
2.2.6.1. Животные, использовавшиеся для проведения фармакокинети-

ческих исследований
2.2.6.2. Постановка фармакокинетического исследования
2.2.6.3. Методика оценки фармакокинетических показателей
2.2.7. Иммунизация мышей
2.2.8. Статистическая обработка
ГЛАВА Ш. ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОЗИЦИИ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. В СУБСТАНЦИИ И ОЦЕНКА ИХ СПОСОБНОСТИ СТИМУЛИРОВАТЬ ГУМОРАЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА
3.1. Идентификация композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub
3.1.1. Идентификация композиции рекомбинантных белков рЕ7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. с помощью электрофореза в полиакриламидном геле
3.1.2. Идентификация композиции рекомбинантых белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и рЕ7/18-Hsp70 M.tub. с использованием вестерн-блот анализа
3.1.3. Идентификация композиции рекомбинантых белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. с помощью иммуноферментного метода анализа
3.1.4. Спектрофотометрическое определение композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub., в модификации
с применением БХК
3.1.4.1. Методика спектрофотометрического определения композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub., в модификации макрометода с применением БХК
3.1.4.2. Методика спектрофотометрического определения композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub., в модификации микрометода с применением БХК
3.2. Стимулирование гуморальных реакций иммунитета экспериментальных животных белками теплового шока
3.2.1. Б езадъювантная иммунизация
3.2.2. Иммунизация с использованием адъюванта Фрейнда
ГЛАВА IV. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ВАГИНАЛЬНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ, СОДЕРЖАЩИХ КОМПОЗИЦИЮ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ПОЛУЧЕННЫХ ВАГИНАЛЬНЫХ СУППОЗИТО-ТО-

4.1. Обоснование состава вагинальных суппозиториев
4.2 Технология получения вагинальных суппозиториев
4.2.1. Разработка технологии получения вагинальных суппозиториев на гидрофобной основе

4.2.2. Разработка технологии получения вагинальных суппозиториев на гидрофильной основе
4.2.3. Разработка технологии получения вагинальных суппозиториев на дифильной основе
4.3. Оценка качества вагинальных суппозиториев с композицией рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub
4.4. Исследование стабильности вагинальных суппозиториев с композицией рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp
M.tub
ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ВАГИНАЛЬНЫХ МЯГКИХ ЖЕЛАТИНОВЫХ КАПСУЛ, СОДЕРЖАЩИХ КОМПОЗИЦИЮ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ рЕ7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ
5.1. Обоснование состава вагинальных мягких желатиновых капсул
5.2. Технология получения мягких желатиновых капсул с композицией рекомбинантных белков.рЕ7/16-Нзр70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. для интравагинального введения
5.3. Оценка качества вагинальных мягких желатиновых капсул с композицией рекомбинантных белков. pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub
5.4. Исследование стабильности вагинальных МЖК с композицией рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M'tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub.
ГЛАВА VII РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ НА БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ
6.1. Отработка методики определение: концентрации композиции рекомбинантных белков pE7/16-PIsp70 M’tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. в плазме крови экспериментальных животных
6.2. Результаты определения концентрации композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. в плазме крови экспериментальных животных
6.2.1. Фармакокинетические показатели
6.3.Результаты определения микробиологической контаминации образцов
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ;
Список литературы:
Приложения!
Созданы основы, состоящие из сплавов гидрогенизированных жиров с эмульгаторами, жироподобными веществами, углеводородами. Широко используют в практике фракции растительных гидрогенизированных жиров. По своей сути это продукты термического или химического фракционирования. Довольно часто используется в практике твердый жир типов А, В и С. Твердый жир типа А содержит твердового жира кондитерского 100%, твердый жир типа В содержит 95-99% твердого жира кондитерского с добавлением 1-5% триа-цилглицеридов стеариновой кислоты, твердый жир типа С содержит до 5% смеси эфиров полиглицерина и стеариновой кислоты.
Достаточно распространенной является основа Витепсол.
Витепсол представляет собой смесь моно-, ди- и триглицеридов растительных кислот с длиной углеродной цепи СП- С18. Основную часть составляют триглицериды лауриновой кислоты. Выпускается витепсол различных групп (Н, W, S, Е), различающийся рядом физико-химических свойств (температура плавления и затвердевания, кислотное, йодное, перекисное числа).
Были изучены физические свойства (температура плавления, время расплавления и разрушения, механическая-прочность) б видов суппозиторных основ: витепсол Н-15, W-31, S-55, Ovucire WL 3264, WL 2944, 3460 при хранении в течение 12 месяцев при температуре 4°С, 25°С, 30°С. Показана пригодность-основ Витепсол Н-15, Ovucire WL 3264, WL 2944 (все основы характеризуются; повышенным гидроксильным числом и температурой плавления 33,5-35,5°С) для изготовления суппозиториев с лекарственными веществами, которые не влияют на характеристики основ. Для растворимых лекарственных веществ, которые уменьшают температуру плавления суппозиториев, рекомендуется. применять основы Витепсол W-31 и Ovucire 3460 [12,32].
1.7.1.6. Гидрофильные основы
В производстве вагинальных суппозиториев используются- различные гидрофильные основы. Ряд основ, к их числу относятся желатино-