Биотехнологические аспекты вирусной безопасности препаратов иммуноглобулинов: методология, производство, стандартизация.

• Автор: Зубкова, Наталия Васильевна
• Шифр специальности: 14.04.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 245 с. : 8 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Плазма крови человека - уникальная субстанция для получения биологически активных веществ, обладающих лечебным потенциалом
1.2. Препараты иммуноглобулинов: общая характеристика, лечебные свойства, история производственных методов
1.3. Основные аспекты вирусной безопасности сырья для производства препаратов иммуноглобулинов

1.4. Безопасность иммуноглобулинов в процессе производства

1.4.1. Освобождение от вирусов при выделении и очистке

1.4.2. Специальные методы инактивации вирусов: классификация и

характеристика

1.5. Инновации в технологии инактивации вирусов

1.6. Гарантия качества и безопасности в процессе производства
1.7. Препараты иммуноглобулинов в структуре рынка препаратов крови..
1.8. Итоги литературного обзора и перспективы развития отрасли по
производству препаратов из плазмы крови доноров в России
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Дизайн исследований
2.2. Материалы
2.2.1. Объекты исследования
2.2.2. Референс-материалы
2.2.3. Раствор иммуноглобулина в человека
2.2.4. Рабочие растворы реагентов для инактивации и удаления вирусов
2.2.5. Вируссодержащие материалы для модельных опытов
2.3. Методы
2.3.1. Определение серологических маркеров вирусов методом ИФА
2.3.2. Определение молекулярно-генетических маркеров вирусов методом ПЦР
2.3.3. Моделирование технологических процессов и оценка эффективности элиминации и инактивации вирусов
2.3.4. Физико-химические свойства иммуноглобулинов
2.3.5. Биологические свойства иммуноглобулинов
2.3.6. Газохроматографическое определение ТБФ
2.3.7. Газохроматографическое определение натрия холата
2.3.8. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Закономерности выявления маркеров гемотрансмиссивных вирусов у доноров
3.1.1. Серологические и молекулярно-генетические маркеры ВГС
3.1.2. Особенности выявления ВИЧ-инфекции у доноров
3.1.3. Оценка роли иммунологических и молекулярно-генетических методов для выявления маркеров ВГВ в плазме крови доноров
3.1.4. Выявление маркеров «неактуальных» гемотрансмиссивных вирусов у
доноров
3.2. Методологические подходы к повышению вирусной безопасности плазмы для фракционирования
3.2.1. Эффективность выявления маркеров вирусов в минипулах плазмы для фракционирования
3.2.2. Оценка остаточного риска вирусной контаминации производственных пулов плазмы
3.2.3. Разработка алгоритма входного контроля сырья для производства препаратов из плазмы крови доноров
3.3. Стандартизация генамплификационных методов исследований
3.3.1. Изготовление и аттестация отраслевого стандартного образца содержания РНК ВГС (ОСО РНК ВГС)

3.3.2. Определение предела обнаружения РНК ВГС, ДНК ВГВ, РЖ ВИЧ при использовании мультиплексных диагностических наборов для ПЦР-анализа
3.4. Разработка вирусбезопасной технологии производства препаратов
иммуноглобулинов
3.4.1. Разработка отечественного иммуноглобулина человека нормального для внутривенного введения с сольвент-детергентной стадией инактивации вирусов
3.4.2. Новые методы химической инактивации вирусов в производстве иммуноглобулинов
3.4.3. Сравнительная характеристика иммуноглобулинов, полученных с
использованием разных технологических схем производства
3.5. Валидация технологических стадий элиминации и инактивации
вирусов
3.5.1. Эффективность удаления ВГС и B19V при спиртовом фракционировании и сорбции гидроксидом алюминия
3.5.2. Валидация СД-обработки на модели ВГВУ
3.5.3. Валидация СД-обработки с использованием модельного вируса ВВД-БСКРС
3.6. Контроль вирусной безопасности готовых лекарственных форм
иммуноглобулинов
3.6.1. Алгоритм контроля препаратов иммуноглобулинов на маркеры ВГВ
3.6.2. Оценка специфичности и чувствительности метода ИФА для
определения антител к ВГС в препаратах иммуноглобулинов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

Продолжение таблицы
1 2 3 4
ВЭБ Herpes viridae ДНК имеется анти-ВЭБ-1§М, анти-ВЭБ-^Ц, ДНК ВЭБ**
ЦМВ Herpes viridae ДНК Имеется анти-ЦМВ, анти-ЦМВ ^М, ДНК ЦМВ**
ВПГ8 ДНК Имеется серологические тесты применяются редко из-за перекрестных реакций, ДНК ВИГ**
ВЗН Flavi viridae РНК Имеется анти-ВЗН РНК ВЗН
*HBeAg -антиген инфекционное ВГВ; анти-НВс - антитела к ядерному антигену ВГВ (HBcAg); анти-НВе - антитела к HBeAg; анти-BrD - антитела к BTD; анти-В19У -антитела к B19V; анти-ВГА - антитела к ВГА; аити-ВГО - антитела к BrG; анти-TTV -антитела к TTV; an-HTLVI,2 - антитела к HTLVI.2; анти-ВЭБ - антитела к ВЭБ; анти-ЦМВ - антитела к ЦМВ; анти-ВЗН - антитела к ВЗН.
** предпочтительнее исследовать лимфоциты
В большинстве стран мира тестирование доноров на маркеры ВГС, ВГВ, ВИЧ1,2 является обязательным. При неблагоприятной эпидемической обстановке органы здравоохранения могут принять решение о расширении перечня обязательных тестов, но это, как правило, связано с дополнительными расходами, трудозатратами и сокращением донорского контингента [88].
Основным способом обнаружения инфекции у доноров до недавнего времени было тестирование плазмы крови на присутствие HBsAg, анти-ВГС и анти-ВИЧ1,2 методом иммуноферментного анализа (ИФА). Однако в период с 1995 по 2000 год в разных странах мира были выполнены исследования, которые продемонстрировали, что обследование доноров методом ИФА не позволяет эффективно выявлять инфицированные донации, особенно в период «серологического окна» [42; 59; 89; 119; 139; 145; 143; 178; 209].