Клинико-лабораторная оценка биологически активных соединений лекарственного средства чистотела большого

• Автор: Чомаев, Хаджи-Мурат Пахарбиевич
• Шифр специальности: 14.03.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 115 с. : 20 ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Ботанические особенности чистотела большого (Chelidonium majus)

1.2. Алкалоиды чистотела большого Chelidonium majus

1.3. Влияние различных факторов на содержания алкалоидов в чистотеле большом

1.4. Методы определения алкалоидов

1.5. Фармакологическое действие алкалоидов чистотела большого

1.6. Лекарственные формы чистотела большого и их применение в народной и научной медицине

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Объект исследования
2.2. Методы хроматографии и спектрофотометрического анализа для идентификации алкалоидов чистотела большого
2.3. Проточная цитометрия для определения цитотоксического и противоопухолевого действия экстракта чистотела большого
2.4. Методы исследований биохимических показателей сыворотки крови
2.5. Статистические методы исследования
Глава 3. Хроматографические и спектральные характеристики соединений, содержащихся в экстракте чистотела большого
3.1. Гель-хроматография - основной метод разделения компонентов из экстракта чистотела большого
3.2. Спектральные характеристики соединений выделяемых экстракцией из чистотела большого
Глава 4. Исследование антибактериального, противоопухолевого и
цитотоксического действия экстракта чистотела большого
4.1. Антибактериальное действие алкалоидов чистотела большого на клетки штамма E
4.2. Цитотоксическое действие экстракта чистотела большого
4.3. Противоопухолевое действие экстракта чистотела большого
Глава 5. Взаимодействие экстракта чистотела большого с нуклеиновыми кислотами
5.1. Изучение взаимодействия экстракта чистотела большого с нуклеосомной ДНК, выделенной из клинических штаммов
5.2. Взаимодействие экстракта чистотела с плазмидной ДНК, выделенной из клинических штаммов
Глава 6. Исследование влияния экстракта чистотела большого на биохимические показатели
6.1. Действие экстракта чистотела большого на основные биохимические показатели белых беспородных мышей-самцов
6.2. Изучение активности диагностического фермента крови - ЛДГ плазмы крови доноров в присутствии экстракта чистотела
Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

Список сокращений
АлТ - аланинаминотрансфераза;
АсТ - аспартатаминотрансфераза;
ГГТ - у-глутамилтрансфераза;
ГЖХ - газово-жидкостная хроматография;
ДДС - додецилсульфат натрия;
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;
КД - круговой дихроизм;
КК - креатинкиназа;
ЛДГ - лактатдегидрогеназа;
НАД - никотинамиддинуклеотид;
НАД*Н2 - никотинамиддинуклеотид восстановленный; РНК - рибонуклеиновая кислота;
ТЕ - трис-ЭДТА;
Трис - тригидроксиметиламинометан;
ТСХ - тонкослойная хроматография;
ТЦБ - трис-цитратный буфер;
УФ - ультрафиолет;
ЩФ - щелочная фосфатаза;
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат.

2.3.3. Окрашивание ДНК
Процедуру окрашивания ДНК объединяли с дезагрегацией солидных опухолей, что позволяло получать результаты всего за один час.
1. Суспендировали клетки в МЕМ, содержащей 5%-ную сыворотку плода коровы, чтобы концентрация составила примерно 2,5 105 клеток/мл.
2. Для каждого разведения чистотела брали три маркированные пластиковые пробирки; в две из них наливали по 2 мл суспензии, а в третью - 2 мл среды.
3. Во вторые и третьи пробирки добавляли по 2105 лимфоцитов периферической крови человека в 0,1 мл среды. Таким образом, для каждого разведения экстракта имелись три пробирки со следующим содержанием:
• пробирка А: 106 опухолевых клеток в 2 мл среды
• пробирка В: 106 опухолевых клеток и 2105 лимфоцитов в 2, 1 мл среды
• пробирка С: 2105 лимфоцитов в 2,1 мл среды
4. В каждую из пробирок добавляли 0,5 мл окрашивающего раствора, содержащего:
• 250 мкг/мл йодистого пропидия (ИП)
• 1 мг/мл РНКазы
• 1%-ый тритон Х-100 в воде
Таким образом, конечная концентрация этих веществ составляла: ИП — 50 мкг/мл; РНК-аза — 200 мкг/мл; тритон Х-100 -2 мг/мл.
5. Суспензию хорошо перемешивали и оставляли на 30 минут для окрашивания при комнатной температуре в защищенном от света месте.
6. Непосредственно перед проведением проточной цитометрии продавливали суспензию через шприц с иглой № 25, чтобы дезагрегировать сгустки.