Диагностика нарушений углеводного обмена с поиощью определения гликированного гемоглобина в крови методом капиллярного изоэлектрического фокусирования

• Автор: Королев, Виталий Александрович
• Шифр специальности: 14.03.10
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 302 с. : 27 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Современный подход к классификации сахарного диабета и

гликированию

1Л Л Гликирование - один из самых тонких механизмов

постгрансляционного процессинга

1Л .1Л Ферментативное гликирование

1Л Л .2 Неферментативное гликирование

1Л .2 Гликирование белков и липидов

1 Л.З Механизмы гликирования при различных патологических процессах
1.2 Значение гликированного гемоглобина для контроля сахарного диабета
1.2.1 Гликированный гемоглобин - важный предиктор патологии внутренних органов в организме
1.3 Клиническое значение определения других гликированных белков
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Приготовление гемолизатов
2.2 Методы исследования
2.2.1 Капиллярный метод определения гликированных белков
2.2.2 Колориметрические методы определения
2.2.2.1 Метод «Диабет-тест» для определения гликированного гемоглобина
2.2.2.2 Метод, основанный на неполном гидролизе гликированного белка соляной кислотой
2.2.2.3 Колориметрический метод с использованием фосфорной кислоты для определения HbAic (Lacherna)
2.2 Хроматографические методы
2.2.3 Метод аффинной хроматографии Abbott
2.2.4 Метод катионобменной хроматографии на микроколонках Sentinel.
2.2.5 Метод катионобменной хроматографии под высоким давлением (HPLC)
2.3. Общеклинические биохимические обследования
2.4 Распределение обследованных больных

2.5 Статистическая обработка полученных результатов
2.5.1 Представление данных (см.приложение Б)
2.5.2 Алгоритм проведения корреляционного и регрессионного анализа в стандартных статистических программах Microsoft Exel и SPSS for Windows (см. приложение В)
ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА КАПИЛЛЯРНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКИРОВАННЫХ БЕЛКОВ
3.1 Ход опыта
3.1.1 Определение гликированного гемоглобина Ajc
3.1.2 Оценка аналитической надежности метода ИЭФ+ФК
3.1.3 Применение капиллярного метода для определения гликированного альбумина
3.2. Сравнение различных методов определения гемоглобина А]С
3.2.1 Анализ и клиническая оценка колориметрического метода определения гликированного гемоглобина, основанного на неполном гидролизе с щавелевой кислотой
3.2.2 Анализ и клиническая оценка колориметрического метода определения гликированного гемоглобина, основанного на неполном гидролизе с фосфорной кислотой (Lachema)
3.2.3 Оценка контрольных параметров сахарного диабета при применении различных методов определения гликированного гемоглобина
3.2.4 Применение вычислительной программы с использованием экранной системы координат для интерпретации HbAic у больных СД1 и СД2
3.2.5 Сравнение колориметрического метода с предварительной фокусировкой И колориметрии С ФК ДЛЯ определения HbAic у больных сахарным диабетом
3.2.6 Сравнение нескольких (более двух) метов определения гликированного гемоглобина
3.2.6.1 Сравнение четырех методов определения гликированного гемоглобина
3.2.6.2 Сравнение пяти методов определения гликированного гемоглобина
ГЛАВА 4 КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ГЛИКИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
4.1 Клиническая интерпретация уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом
4.2. Значение уровня HbAic при проспективном 5-летнем наблюдении у больных СД
4.3 Результат проведенного контроля сахарного диабета на курорте
ГЛАВА 5 КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Г ЛИГИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА У БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ
5Л Значение использования пикированного гемоглобина в нефрологии
5.1.1 Контроль диабетической нефропатии
5.1.2 Клиническое значение определения HbAic при гломерулярных болезнях
4.3. Клиническое значение определения HbAic у больных с болезнями системы кровообращения
4.4 Клиническое значение определения НЬА]С у больных с болезнями печени
4.5 Клиническое значение определения гликированного гемоглобина в реаниматологии
4.6 Гликированный гемоглобин и контроль хронических заболеваний на курорте
ГЛАВА 6 МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНОЙ ИНФОРМАТИВНОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ HbAic
ГЛАВА 7 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

дезоксиглюкозоны, поскольку именно их взаимодействие с белком в дальнейшем приводит к образованию целого ряда конечных продуктов реакции Майяра.
Установлено, что появление разных КПГ в структуре белка может происходить как с обязательным участием кислорода, так и без него. Например, такое соединение как пентозидин, было описано как подкласс КПГ, образующийся только при окислительных реакциях (Schlider E.D., Waguer Е Nerlich A.G., 1997). Начиная с появления теории Wolff S.P. о важной роли аутоокисления глюкозы, а затем гипотезы гликоокисления, предложенной Baynes J.W., внимание исследователей было направлено на выяснение роли окислительных реакций в процессе неферментативного гликозилирования белка. Фактически с этого периода началось развитие теории «оксидантного» стресса белков, когда Wolff S.P. и Dean R.T. в 1987 году показали, что окисление свободной глюкозы (или других моносахаридов) играет важную роль в модификации белков с образованием а-альдегидов и активных форм кислорода, и ввели термин «аутоокислительное гликозилирование», чтобы описать реакции белков с активными соединениями, образующимися во время реакции аутоокисления глюкозы. До этого момента основная роль в образовании КПГ отводилась в основном продуктам Амадори и Шиффовым основаниям (Wolf S.P., Dean R.T., 1987). Аутоокисление глюкозы сопровождается появлением активных форм кислорода (02', Н202, ОН*) и образованием дикарбонилов (а-кето-альдегидов), которые чрезвычайно активно вступают в реакцию с аминогруппами белка с образованием соединений, сходных с продуктами Амадори и по химической структуре и по механизму их последующей модификации (Hunt J.V., Dean R.T., Wolff S.P., 1988 ; Wolf S.P., Dean R.T., 1987 ; Wolf S.P., Jiang Z.Y., Hunt J.V., 1991). В дальнейшем теория «оксидантного» стресса была развита Baynes J.W. в 1991 (Baynes J.W., Thorpe S.R., 2000; Baynes J.W., Thorpe S.R., 1999). Согласно теории этого автора преобладающее значение в механизме повреждения структуры белка имеет «оксидативный» стресс,