Индукция противоопухолевого ответа in vitro аутологичными дендритными клетками, нагруженными опухолевыми антигенами

• Автор: Облеухова, Ирина Александровна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 109 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности клеточного иммунного ответа в процессе развития онкологической патологии

1.2. Роль дендритных клеток в процессе онкогенеза

1.2.1. Общая характеристика дендритных клеток

1.2.2. Технологии модуляции противоопухолевого иммунного ответа с привлечением дендритных клеток

1.2.3. Клиническое применение вакцин на основе дендритных клеток

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 .Получение зрелых аутологичных антиген-нагруженных дендритных клеток из мононуклеарных клеток периферической крови больных злокачественными новобразованиями различной нозологии
3.2 Индукция цитотоксического противоопухолевого иммунного ответа in vitro с помощью антиген-нагруженных дендритных клеток больных эпителиальным раком яичника и больных колоректальным раком
3.2.1. Влияние антиген-нагруженных дендритных клеток на пролиферативную активность мононуклеарных клеток in vitro больных эпителиальным раком яичника и больных колоректальным раком.
3.2.2. Влияние in vitro антиген-нагруженных дендритных клеток и rhIL-18 с rhlL-12 на цитотоксическую активность мононуклеарных клеток больных эпителиальным раком яичника и больных колоректальным раком.
3.2.3. Влияние in vitro антиген-нагруженных дендритных клеток и rhIL-18 с rhlL-12 на экспрессию перфорина, гранзима В мононуклеарными клетками больных эпителиальным раком яичника и больных колоректальным раком.
3.2.4. Влияние антиген-нагруженных дендритных клеток и rhIL-18 с rhlL-12 на продукцию IFN-y, IL-4 в культуре мононуклеарных клеток больных эпителиальным раком яичника и больных колоректальным раком.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ДК - дендритные клетки
МНК - мононуклеарные клетки
ПК - периферическая кровь
CCR7 -С-Схемокиновый рецептор
СЕА- карциноэмбриональный антиген
CTL - цитотоксические Т-лимфоциты
DEC205/CD205 - лектиновый рецептор
FCS - эмбриональная телячья сыворотка
GILZ- глюкокортикоид-индуцированный зиппер
GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор роста
IFN - интерферон IL - интерлейкин
KFLL- гемоцианин моллюска фиссурелии LPS (ЛПС) -липополисахарид LTD4- лейкотриен D4 LTE4- лейкотриен Е
МАРК - митоген-активируемая протеинкиназа
NFkB - ядерный фактор, усиливающий легкую цепь каппа, активированных В-клеток
NK - натуральные киллеры
NY-ESO-1 - раково-семенниковый антиген
Р53 - белок р
PGE2 - простагландин Е
РІЗК - каталитическая субъединица у фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат-3-киназы
rhIL - рекомбинантный человеческий интерлейкин
sCD95/FAS - растворимый рецептор CD
STAT3 -сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 3 ТАА -опухоль-ассоциированные антигены TGF-p - трансформирующий фактор роста р
TIDC - опухоль-инфильтрующие дендритные клетки
TIL - опухоль-инфильтрующие лимфоциты
TNF-a - фактор некроза опухоли альфа
TRAIL - TNF-ассоциированный апоптоз-индуцирующий лиганд индуцирующий апоптоз лиганд, связанный с фактором некроза опухоли
TRAIL-R3 (DcR-1) - рецептор 3 KTNF-ассоциированному апоптоз-индуцирующему лиганду
TRAIL-R4 (DcR-2) - рецептор 4 к TNF-ассоциированному апоптоз-индуцирующему лиганду
TRA1L-R5 (OPG) - рецептор 5кТМТ-ассоциированному апоптоз-индуцирующему лиганду
VEGF - фактор роста эндотелия сосудов
WT1 - опухолевый протеин
ZAP70 -ассоциированная с ^-цепью протеин киназа

Получение аутологичных клеток опухоли и опухолевых антигенов в составе лизата опухолевых клеток.
Аутологичные клетки опухоли выделяли из биопсийного образца, полученного при операции, путем механического гомогенизирования (гомогенизатор Поттера), фильтровали от крупного детрита через металлический фильтр. Далее отмывали 3 раза в бессывороточной среде, содержащей двойную концентрацию антибиотиков и амфотерицина В (5 мкг/мл). Полученные клетки делили на две равные части. Одну замораживали в FCS (РАА, Австрия), содержащей 10% DMSO (Рапгеас, Испания). А издругой - получали смесь опухолевых антигенов путем трехкратного цикла замораживания-оттаивания с последующим фильтрованием через фильтр-насадку (0,45 мкм) (Millipore, США). Концентрацию белка определяли по методу Бредфорд и спектрофотометрическим методом (NanoDrop 2000С и соответствующее программное обеспечение).
Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови больных онкологическими заболеваниями различной нозологии и получение прилипающей фракции мононуклеарных клеток.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли путем центрифугирования цельной крови в градиенте плотности фиколл-урографина (р= 1,077 г/л). Для этого 6 мл цельной крови наслаивали на 3 мл фиколл-урографина и центрифугировали 30 мин. при 1500 об/мин [37]. Клетки интерфазного кольца собирали, дважды отмывали в среде RPMI-1640 (ГНЦ ВБ «Вектор», Россия), после чего ресуспендировали в5 мл полной среды RPMI-1640, содержащей 10% FCS (РАА, Австрия), 2 мМ L-глютамина (ГНЦ ВБ «Вектор», Россия), 10 мМ HEPES буфера (Sigma, США), 5*10'4М 2-меркаптоэтанола (Sigma, США), 80 мкг/мл гентамицина (АО «Самсон» Санкт-Петербург, Россия), 100 мкг/мл ампициллина (ЗАО «Синтез» Курган, Россия), переносили в чашку Петри (