Сравнительный анализ функциональных свойств нейтрофильных гранулоцитов периферической крови и мукозальных секретов у здоровых мужчин и женщин

• Автор: Маркова, Виталия Александровна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 136 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение
Глава 1 Нентрофильные гранулоцнты - клетки врояеденного иммунитета (обзор литературы)

1.1 Нейтрофильные гранулоциты и гетерогенность их популяции

1.2 Современные методы оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов

1.2.1 Внеклеточные ловушки как новый механизм внеклеточной бактерицидности нейтрофильных гранулоцитов

1.2.2 Проточная цитофлюориметрия как современный метод

иммунодиагностики

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Характеристика обследуемых лиц

2.2 Материал для исследования

2.3 Получение лейкоцитарной взвеси
2.4 Выделение нейтрофилов из периферической венозной крови
2.5 Метод забора материала из вагинального и цервикального секрета репродуктивного тракта женщин
2.6 Метод забора слюны
2.7 Активация нейтрофильных гранулоцитов иммуностимуляторами
2.8 Методы обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек
2.8.1 Метод обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в фиксированных препаратах цельной крови
2.8.2 Метод обнаружения внеклеточных ловушек, образованных нейтрофильными гранулоцитами, выделенными из периферической крови
2.8.3 Метод обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах
2.9 Исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов

2.9.1 Метод определения фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов с помощью световой микроскопии
2.9.2 Определение фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови методом проточной цитофлюориметрии
2.9.3 Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов с помощью НСТ-теста
2.9.4 Определение внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов периферической крови методом проточной цитофлюориметрии
2.9.5 Метод определения лизосомальной активности нейтрофильных гранулоцитов мукозальных секретов
2.10 Определение рецепторов СЭПЬ и СБ95 на нейтрофильных гранулоцитах методом проточной цитофлюориметрии
2.11 Методы статистической обработки материала
Глава 3 Особенности функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов слюны, вагинального и цервикального секретов
3.1 Оценка соотношения морфологических форм интактных нейтрофильных гранулоцитов и количества нейтрофильных внеклеточных ловушек в слюне, вагинальном и цервикальном секретах
3.2 Оценка лизосомальной активности интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах
3.3 Оценка фагоцитарной функции интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах
3.4 Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма интактных нейтрофильных гранулоцитов в различных мукозальных секретах

Глава 4 Функциональный ответ нейтрофнльных гранулоцнтов слюны, вагинального и цервикального секретов на стимуляцию пирогеналом и форбол-12-миристат-13-ацетатом
4.1 Влияние пирогенала и ФМА на соотношение морфологических форм нейтрофнльных гранулоцитов и количества нейтрофнльных внеклеточных ловушек в слюне, вагинальном и цервикальном секретах
4.2 Оценка лизосомальной активности нейтрофилов мукозальных секретов после активации пирогеналом и ФМА
4.3 Оценка фагоцитарной функции нейтрофнльных гранулоцитов различных мукозальных секретов в ответ на стимуляцию пирогеналом и ФМА
4.4 Оценка показателей НСТ-теста нейтрофилов слюны, вагинального и
цервикального секретов в ответ на стимуляцию пирогеналом и ФМА
Глава 5 Особенности функциональной активности нейтрофнльных гранулоцитов цельной крови, лейкоцитарной взвеси и чистой фракции до и после активации у здоровых женщин и мужчин
5.1 Оценка количества внеклеточных ловушек, присутствующих в цельной крови, лейкоцитарной взвеси и чистой фракции нейтрофилов, до
и после активации пирогеналом и ФМА
5.2 Оценка функциональной активности нейтрофнльных гранулоцитов методом проточной цитофлюориметрии
5.3 Изменение экспрессии рецепторов СИНЬ и СИ95 на нейтрофнльных
гранулоцитов периферичемкой крови до и после активации ФМА
Заключение
Выводы
Список наиболее часто используемых сокращений
Список литературы

Глава 2 Материалы и методы исследования
2.1 Характеристика обследуемых лиц
Для достижения поставленной цели за период с 2010 по 2012 год на базе Научно-исследовательского института иммунологии ЮУГМУ было проведено обследование 30 практически здоровых мужчин и 30 практически здоровых небеременных женщин в первую и вторую фазы менструального цикла, чей возраст варьировался от 18 до 35 года. Критериями включения в исследование являлись добровольное согласие на обследование, оформленное в письменном виде, отсутствие хронических заболеваний, приема гормональных препаратов и перенесенных вирусных заболеваний в течение последних трех месяцев.
2.2 Материал для исследования
Материалом для исследования являлись периферическая венозная гепаринизированная кровь, лейкоцитарная взвесь, чистая фракция нейтрофнльных гранулоцитов, цервикальный секрет, вагинальный секрет и слюна.
2.3 Получение лейкоцитарной взвеси
Для получения лейкоцитарной взвеси использовали кровь, взятую из локтевой вены в вакуумную пробирку с гепарином в качестве антикоагулянта (12-30 МЕ гепарина на 1мл крови), оставляли при комнатной температуре на 30 минут. После седиментации эритроцитов, обогащенную лейкоцитами