Локальный иммунный ответ в ткани легких мышей с высокой и низкой чувствительностью к инфекции, вызванной Mycobacterium avium

• Автор: Кондратьева, Елена Валерьевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 73 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

1.ВВЕДЕНИ Е

Актуальность проблемы

Цель и задачи исследования

Научная новизна

Практическая значимость исследования

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Общая характеристика нетуберкулезных патогенных микобактерий

2.2 Экспериментальные модели инфекции, вызванной М. avium

2.3 Ранние взаимодействия М. avium с клетками хозяина

2.4 Адаптивный иммунный ответ на М. avium
2.4.1 .Молекулы
2.4.2. Клетки
2.4.3. Ткани
2.5. Генетический контроль инфекции, вызванной М. avium
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Экспериментальные животные
3.2. Микобактериальная культура
3.3. Заражение животных
3.4. Определение количества микобактерий в органах зараженных животных
3.5. Получение суспензии клеток легкого
3.6. Проточная цитофлуороиетрия
3.7. Гистологические исследования

3.8. Иммуногистохимический анализ
3.9.Определение продукции цитокинов
3.10. Определение экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени
3.11. Выявление гипоксии в ткани легких
3.12. Определение аллелей renaNrampl
3.13. Статистическая обработка
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Определение восприимчивости к заражению М. avium в панели инбредных
линий мышей
4.2. Характер легочной патологии определяется чувствительностью мышей к инфекции
4.3. Клеточная инфильтрация легких мышей, зараженных М. avium, и общая картина патологии
4.4. Продукция цитокинов в легочной ткани
4.5. Регуляция миграции нейтрофилов: экспрессия генов хемокинов
4.6. Nrampl- основной ген, определяющий чувствительность к М. avium
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Список сокращений.
БСА—бычий сывороточный альбумин
ВИЧ—вирус иммунодефицита человека
ДАБ— диаминобензидин
КОЕ—колониеобразующая единица
ЛПС— липополисахарид
МСБ— маннозосвязывающий белок
НТМ—нетуберкулезная микобактерия
ПЦР—полимеразная цепная реакция
РНК—рибонуклеиновая кислота
СПИД—синдром приобретенного иммунодефицита
BCG—бацилла Кальметта-Герена
CD—дифференцировочный антиген лейкоцитов
CR—рецептор комплемента
FCS—эмбриональная телячья сыворотка
FITS—флуоросцеин-изотиоционат
G-CSF—колониестимулирующий фактор для гранулоцитов GM-CSF— колониестимулирующий фактор для гранулоцитов и макрофагов IFN-y—интерферон гамма IL—интерлейкин
iNOS—индуцибельная нитрит-синтетаза MAC—комплекс микобактерии авиум МНС—главный комплекс гистосовместимости Мір—макрофатальный белок воспаления

Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Определение восприимчивости к заражению М. avium в панели инбредных
линий мышей
Ранее в нашей лаборатории было показано, что мыши I/St чрезвычайно чувствительны к М. tuberculosis, что выражается в развитии тяжелого легочного заболевания в различных экспериментальных моделях острого, хронического и реактивационного туберкулеза [Nikonenko, 2000; Eruslanov, 2004; Radaeva, 2005]. Чувствительность к туберкулезу не зависит от гена Nrampl, поскольку мыши I/St несут аллель резистентности Nrampl' [Lavebratt, 1999], а контролируется несколькими взаимодействующими QTL генами, локализованными в хромосомах 3,9, 17 и X [Lavebratt et al., 1999; Sanchez et al., 2003]. При заражении мышей I/St вирулентными штаммами Chlamydia pneumoniae и Salmonella enterica Typhimurium, они также оказались восприимчивы к этим внутриклеточным патогенам, что выражалось в сокращении времени выживания, повышенным уровнем провоспалительных цитокинов IL-6 и TNF-a и быстрым развитием патологии [Nesterenko, 2006]. Естественно, было разумно предположить, что линия I/St представляет интересный пример Агаот/П-независимой чувствительности к широкому спектру внутриклеточных инфекций. Ранее ответ этой линии мышей на М. avium не исследовался.
В первой серии экспериментов мы произвели внутривенное заражение групп мышей (по 10 животных в каждой группе) линий В6 (Nrampls), BALB/c (NrampIs), СЗН (Nrampl'), A/Sn (Nrampl'), и I/St (Nrampl') M. avium штамма 724 в дозе 107 КОЕ/животное. Бактериальную нагрузку в легких оценивали через 3 и 8 недель после заражения. В соответствии с ранее опубликованными наблюдениями [Kondratieva, 2007], различия в количестве микобактерий между всеми линиями Nrampl* и Nrampl' составляли от 1,5 до 2 логарифмов (данные не приводятся). К нашему удивлению, мыши I/St, чувствительные и к