Молекулярно-генетические механизмы врожденного иммунитета на уровне слизистых оболочек при патологии инфекционного генеза

• Автор: Ганковская, Оксана Анатольевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 232 с. : 68 ил.

СОДЕРЖАНИЕ:

Список сокращений
Введение
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Современные представления о механизмах врожденного
иммунитета слизистых оболочек
1.1. Основные компоненты врожденного иммунитета
1.1.1. Распознающие рецепторы системы врожденного
иммунитета
1.1.2. Эффекторные молекулы врожденного иммунитета
(противомикробные пептиды)
1.2. Полиморфизм генов, белковые продукты которых участвуют
в реакциях системы врожденного иммунитета
1.3. Характеристика и функции слизистых оболочек
1.3.1. Механизмы развития толерантности к комменсалам на
уровне слизистых оболочек
1.3.2. Иммунные механизмы слизистых оболочек различной
локализации
1.3.2.1. Слизистые оболочки бронхо-легочного и желудочно-
кишечного трактов
1.3.2.2. Роль слизистых оболочек урогенитального тракта женщин в
защите от патогенов
1.3.2.3. Факторы системы врожденного иммунитета в развитии
инфекционной патологии на уровне слизистой оболочки в урогенитальном тракте мужчин
1.3.2.4. Особенности реакций системы врожденного иммунитета в
тканях органа зрения человека

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Характеристика клинических групп
2.2. Материалы
2.3. Методы
2.3.1. Работа с культурами клеток
2.3.2. Оценка цитопатического действия вирусов герпеса in vitro и
in vivo
2.3.3. Выделение нуклеиновых кислот (ДНК и РНК)
2.3.4. Реакция обратной транскрипции
2.3.5. Полимеразная цепная реакция
2.3.6. Рестрикционный анализ
2.3.7. Электрофоретическое разделение ПЦР-продуктов
2.3.8. Выделение мононуклеарных клеток и нейтрофилов из
периферической крови
2.3.9. Стимуляция клеток различными лигандами
2.3.10. Иммуноферментный анализ (ИФА)
2.3.11. Статистические методы анализа
Результаты и обсуждение
Глава 3. Оценка экспрессии генов молекул врожденного
иммунитета в экспериментальных моделях инфекционного процесса in vitro и in vivo с помощью разработанных систем ОТ-ПЦР в режиме реального
времени
3.1. Разработка систем ОТ-ПЦР в режиме реального времени для
оценки экспрессии генов Toll-подобных рецепторов, цитокинов, противомикробных пептидов и других молекул, участвующих в реакциях врожденного иммунитета

3.2. Определение экспрессии генов TLRs, дефенсинов и цитокинов в ответ на патогены в экспериментальных моделях in vitro и in vivo
3.2.1. Исследование факторов системы врожденного иммунитета
на модели культуры перевиваемых линий клеток
3.2.2. Исследование экспрессии генов TLRs и выработки цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и беременных с урогенитальной инфекцией..
3.2.3. Динамика экспрессии и выработки нейтрофильных пептидов (а-дефенсинов) нейтрофилами периферической крови здоровых беременных и беременных с урогенитальной инфекцией
3.2.4. Изучение экспрессии генов TLR9 BD-2 в эпителиальных клетках на модели герпетической инфекции in vivo
Глава 4. Комплексный анализ изменений показателей системы врожденного иммунитета у женщин с физиологически протекающей беременностью и у беременных с урогенитальной инфекцией
4.1. Исследование экспрессии/продукции TLRs, дефенсинов и цитокинов у женщин с инфекционной патологией при беременности
4.1.1. Изменение компонентов врожденного иммунитета в клетках слизистой цервикального канала и в периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью
4.1.2. Изменение показателей врожденного иммунитета (TLRs, дефенсинов) у женщин с неразвивающейся беременностью

убиквитин-конъюгирующий фермент [351]. TRAF6 является убиквитин-лигазой и в комплексе с Ubcl3/UevlA катализирует убиквитинилирование собственного Lys 63, далее TRAF6 активирует ТАК-1. Активированная ТАК-1 способна фосфорилировать МККЗ и МКК6, киназы которые в свою очередь активируют р38 и JNK (c-Jun N-terminal kinase), что приводит к активации фактора АР-1, а также к активации IKK комплекса, что приводит к высвобождению NF-kB [234]. Связывание факторов транскрипции (NFkB и АР-1) с промоторной областью генов провоспалительных цитокинов и хемокинов приводит к их транскрипции. Таким образом, активация TLRs приводит к продукции ФНОа, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, а также противомикробных пептидов.
MyD8 8-независимый сигнальный путь.
Помимо MyD88 существуют другие TIR-содержащие адаптерные белки. Один из них — TIRAP (TIR domain-containing adaptor protein), известный также как Mai (MyD88-adaptor-like) - задействован в процесс активации через TLR2 и TLR4 [234]. В отличие от MyD88, TIRAP не имеет домена смерти (DD). В активацию через TLR3 и TLR4 вовлечена еще одна адапторная молекула - TRIF (TIR-domain-containing adaptor-inducing IFN(3), также известная как TICAM-1. TRIF способен связываться с TRAF6 и таким образом приводить к активации МТдВ. Кроме того, TRIF активирует молекулу ТВК-1, которая в свою очередь приводит к активации транскрипционного фактора IRF-3/7 (IFN regulatory factor) и экспрессии интерферонов I типа (ИФНа и ИФНР) [335].
В клетках возможна активация различных сигнальных путей с TLRs. На примере TLR9 на рисунке 4 представлено переключение с одного сигнального пути на другой. В плазмацитоидных дендритных клетках было определено, что на ранних этапах инфекционного процесса происходит ТТ^-опосредованная выработка ИФН 1 типа, в то время, как позднее (во время образования поздней эндосомы или лизосомы) происходила продукция провоспалительных цитокинов, хемокинов и других молекул [180].