Изучение эффекторных свойств белков -глобулиновой фракции плазмы крови, модифицированных катионами меди и цинка

• Автор: Юшковец, Евгения Николаевна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : 19 ил.

Список сокращений.

АПК - антиген-презентирующие клетки. БСА - бычий сывороточный альбумин.

БТЛ - бласттрансформация лимфоцитов. ВБН - вирус болезни Ньюкасла.

ВЭМК - вирус энцефаломиокардита мышей. ДДК - диэтилдитиокарбамат.

ЕК - естественные киллеры.

ИЛ - интерлейкин.

ИФА - иммуноферментный анализ.

ИФН - интерферон.

КПК - клетки периферической крови.

МНК - мононуклеарные клетки.

МЭ - микроэлемент.

СОД - супероксиддисмутаза.
ТФР - трансформирующий фактор роста. УФ - ультрафиолет.
ФГ’А - фитогемагглютинин.
ФИО - фактор некроза опухоли.
ЦП - церулоплазмин.
ЦПД - цитопатическая доза (вируса).
FcR - Fc рецептор.
PBS - фосфатный буферный раствор.
Th - Т хелперы.
Treg - регуляторные Т-клетки.

Содержание.
Введение
Глава I.
Обзор литературы
Вводная часть
§1.1. Химические особенности цинка и меди - основа регуляции
металлами функциональной активности клеток иммунной системы
п. 1.1.1. Цинк и медь - й-элементы Периодической системы
п. 1.1.2. Иммунные реакции с участием катионов цинка и меди
п.1.1.3. Проблема дефицита цинка и меди в функционировании
иммунной системы
п. 1.1.4. Общие сведения об обмене, транспорте катионов меди и цинка
в организме и поддержание гомеостаза металлов
§1.2. Возможности обмена металлом между биомакромолекулами.
Металлосвязывающие сайты
п. 1.2.1. Металлосвязывающие сайты и металлокомплексы в структурировании и функционировании молекулы 1§0: аминокислоты -
комплексообразователи и олигосахариды
п. 1.2.2. Связывание катионов металлов и его возможное влияние на
конформационное состояние Рс регионов хмолекул антител
§1.3. Результат связывания катионов металлов с у-глобулином -
изменение эффекторных свойств белка
п. 1.3.1. РсЯ как связующее звено в передаче сигнала от молекул
антител клеткам-эффекторам
п. 1.3.2. Клеточные и гуморальные иммунные реакции, связанные с продукцией ИФН-у

п,1.3.3. Взаимодействие и связывание катионов меди и цинка с
человеческим сывороточным у-глобулином
Краткое заключение. Постановка экспериментальной задачи
Глава II.
Материалы и методы исследования
§2.1. Получение образцов человеческого сывороточного у-глобулина, содержащего определенное количество связанных катионов металлов
§2.2. Иммуноферментный анализ у-глобулина, модифицированного
катионами металлов
§2.3. Оценка эффекторных функций модифицированного цинком и медью у-глобулина
Глава III.
Результаты собственных исследований и их обсуждение
§3.1. Подтверждение первичной трансформации Рс регионов молекул
антител при связывании катионов цинка и меди
п.3.1.1. Получение образцов у-глобулина, модифицированного
катионами меди и цинка
п.3.1.2. Иммуноферментный анализ модифицированного катионами
металлов у-глобулина на низких концентрациях образцов
§3.2. Индукция ИФН человеческим сывороточным у-глобулином,
модифицированным медью и цинком
п.3.2.1. Обнаружение ИФН-а, вырабатываемого в присутствии
модифицированных медью и цинком у-глобулинов
п.3.2.2. Динамика выработки ИФН-а и ИФН-у в присутствии
модифицированного металлом у-глобулина
п.3.2.3. Сопоставление результатов ИФА и контрольного биологического тестирования

Следовательно, лиганд-рецепторное взаимодействие, структурно основанное па мембранных РсЯ, включая внутриклеточную трансдукцию сигналов, на транскрипционном уровне может регулировать реализацию основных, прежде всего - клеточных, иммунных реакций. Спектр этих реакций достаточно широк, поскольку замкнутые на семейство ЕсЯ механизмы синтеза и экспрессии ряда ключевых иммуноактивных цитокинов способны определять функционирование всей цитокиновой регуляторной сети.
п.1.3.3. Взаимодействие и связывание катионов меди и цинка с человеческим сывороточным у-глобулнном.
Предшествующими исследованиями сотрудников лаборатории межклеточных взаимодействий НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи установлено, что белки у-глобулиновой фракции плазмы крови по-разному проявляют свои свойства при взаимодействии с катионами меди и цинка в надфизиологических и близких к физиологическим (эквимолярных) концентрациях металла.
Взаимодействие металлов с у-глобулином в надфизиологических концентрациях (значительный молярный избыток) катионов обнаруживает насыщаемость белка металлом [44]. Характер установленной зависимости свидетельствует о наличии на поверхности белковой глобулы определенного числа сайтов, способных присоединять медь или цинк и обеспечивающих возможность развертывания молекулы белка в периглобулярное пространство. При этом медь и цинк вызывают сходные изменения пространственной упаковки белковой глобулы. Зависимое от содержания как меди, так и цинка в растворе развертывание белка, сопровождающееся экспонированием во внемолекулярное пространство скрытых в нативной конформации гидрофобных и иных фрагментов молекулы, приводит к образованию надмолекулярных агрегатов у-глобулина [4, 47, 49, 50].