Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации

• Автор: Воронин, Дмитрий Николаевич
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления об иммунных взаимоотношениях матери и плода

1.2. Роль ЕК в регуляции, иммунного ответа при физиологической и патологической беременности

1.3. Иммунные механизмы регуляции инвазивных свойств

трофобласта

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Организация работы и объем исследования
2.2. Иммунологические методы исследования
Глава 3. ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ДЕЦИДУАЛЬНЫХ ЕСТЕСТВЕННЫХ КИЛЛЕРОВ И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ ПРИ НЕОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И ПРИ ЕЁ СПОНТАННОМ ПРЕРЫВАНИИ НА РАННИХ СРОКАХ.
3.1. Характеристика экспрессии мембранных рецепторов СБ56+ лимфоцитами при неосложненной беременности и спонтанном прерывании беременности на ранних сроках
3.2. Характеристика синтеза и продукции функциональных молекул децидуальными СО 5 6+ ЕК при неосложненной беременности и спонтанном прерывании беременности на ранних сроках
3.3. Роль ШЯу в регуляции функционального состояния децидуальных
С056т естественных киллеров
Глава 4. ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИВНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ЦИТОТРОФОБЛАСТА ПРИ НЕОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ
И ПРИ СПОНТАННОМ ПРЕРЫВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ НА

РАННИХ СРОКАХ
4.1. Особенности синтеза протеолитических ферментов в плаценте при физиологической беременности и при самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации
4.2. Характеристика инвазивной активности клеток трофобласта при физиологической беременности и при самопроизвольном выкидыше на
ранних сроках гестации
Глава 5. РОЛЬ ДЕЦИДУАЛЬНЫХ СО 5 6+ ЕК В РЕГУЛЯЦИИ ИНВАЗИВНЫХ СВОЙСТВ ТРОФОБЛАСТА ПРИ
НЕОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И ПРИ СПОНТАННОМ ПРЕРЫВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ НА РАННИХ СРОКАХ
5.1. Влияние децидуальных естественных киллеров на инвазивную активность клеток трофобласта при неосложнённой беременности и при
самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации
5.2. Влияние 1РЫу на инвазию клеток трофобласта в матригеле при неосложнённой беременности и при самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации
5.3. Влияние клеток трофобласта на децидуальные естественные киллеры при неосложнённой беременности и при самопроизвольном
выкидыше на ранних сроках гестации
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ:
АГ — антиген
АТ - антитела
ЕК — естественные киллеры
ЕК-Т — естественные киллерные Т-лимфоциты
ИФА - иммуноферментный анализ
мАТ — моноклональные антитела
МНК — мононуклеарные клетки
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
ЭВТ — вневорсинчатый трофобласта
CD - cluster of differentiation (кластер дифференцировки)
EGF — эпидермальный ростовой фактор F1TC - флюоресцеин изотиоционат GrB — гранзим В
IDO — indoleamine 2,3-dioxygenase IFN - интерферон
IGF - инсулиноподобный фактор роста IL — интерлейкин
IT AM - иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив
ITIM — иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив
KIR - иммуноглобулин-подобные киллерные рецепторы
LIR - иммуноглобулин-подобные лейкоцитарные рецепторы
LTT — иммуноглобулин-подобные лейкоцитарные транскрипты
ММР - матриксная металлопротеиназа
NCAM — молекула клеточной адгезии нейронов
NCR — рецепторы естественной цитотоксичности
NK — естественные киллеры
PBS - фосфатно-солевой буфер
РЕ - фикоэритрин
РТР - белок тирозиновая фосфатаза
RT-PCR - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
STAT - сигнал трансдуцирующий активатор транскрипции
TGF - трансформирующий фактор роста
ТІМР — тканевой ингибитор металлопротеиназы
и-РА - урокиназный активатор плазминогена

Из полученной популяции МНК удаляли макрофаги с помощью стандартного метода двукратной адгезии на пластике [Фримель Г., 1987]. Для этого МНК, ресуспендированные в RPMI 1640, инкубировали в течение часа в пластиковой чаше Петри. По истечении срока инкубации собирали неприлипающую фракцию клеток. Цитофлюориметрическое исследование полученных образцов клеток показало, что в популяции неприлипающих к пластику клеток содержались.преимущественно лимфоциты. Относительное содержание CD45+CD14- клеток в полученной-фракции составляло 95,44 ± 0,64%.
- Выделение клеток из трофобласта
Выделение обогащенной' популяции: клеток трофобласта из ткани ворсинчатого трофобласта проводили' стандартным ферментативным методом, широко используемым и описанным в литературе [Clover 2000]; Для этого фрагменты ткани ворсинчатого трофобласта отмывали в PBS; механически измельчали и инкубировали со смесью ферментов при 37°С в течение 40 мин при непрерывном перемешивании из расчёта 5 мл смеси ферментов на 1 г ткани. Использовались.следующие ферменты: коллагеназа IV типа (0,5 мг/мл) (Sigma, USA), ДНКаза1 IV типа (0,05 мг/мл)(Sigma, USA), протеаза XIV (1 мг/мл) (Sigma, USA): После окончания времени инкубации реакцию останавливали добавлением 10-кратного объема среды RPMI 1640 в инкубационную смесь. Клетки осаждали, ресуспендировали в Среде DMEM и центрифугировали в двойном градиенте плотности фиколл-урографина (d-1,012, d-1,078). Отбирали кольцо клеток в интерфазе фиколл-урографин d-1,012 — фиколл-верографин d-1,078, отмывали Средой DMEM, доводили концентрацию клеток до 2x10б кл/мл и использовали для дальнейших исследований. Выход клеток составлял 0,7 до 2,5 х10б кл/г/ткани. Жизнеспособность клеток, определяемая по окрашиванию трипановым синим, составляла 85-90%.