Комплексный анализ противомикробных пептидов в биологических средах организма

• Автор: Карташов, Дмитрий Дмитриевич
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 77 с. : 27 ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Противомикробные пептиды. Классификация и характеристика

1.2. Продуценты противомикробных пептидов

1.3. Регуляция экспрессии противомикробных пептидов и связь с То11-подобными рецепторами

1.4. Механизм действия противомикробных пептидов

1.5. Механизмы клеточной гибели при взаимодействии с противомикробными пептидами

1.6. Роль противомикробных пептидов во врожденном и приобретенном иммунитете

1.7. Противомикробные пептиды в женской репродуктивной системе
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Характеристика клинических групп пациентов
2.2. Схема эксперимента
2.3. Получение клеток слизи цервикального канала
2.4. Выделение нейтрофилов периферической крови
2.5. Культивирование нейтрофилов
2.6. Выделение РНК из клеток слизистой цервикального канала и нейтрофилов крови
2.7. Реакция обратной транскрипции
2.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
2.9. Электрофорез в агарозном геле
2.10. Подсчёт и стандартизация результатов полимеразной цепной реакции в реальном времени
2.11. Иммуноферментный анализ
2.12. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Разработка систем количественного определения уровня экспрессии генов р-дефенсина 1 (HBD-1) и а-дефенсина 1 (HNP-1) с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени
3.2. Оценка дефенсинов на локальном и системном уровне в норме и при урогенитальной инфекции
3.2.1. Экспрессия гена HBD-1 в слизистой урогенитального тракта в норме и при урогенитальной инфекции
3.2.2. Концентрация HNP1-3 в норме и при урогенитальной инфекции
3.3. Изменение экспрессии HBD-1 у женщин с физиологически протекающей беременностью и патологией беременности инфекционного генеза
3.3.1 Оценка уровня экспрессии HBD-1 при физиологически протекающей беременности
3.3.2. Экспрессия гена HBD-1 клетками слизистой цервикального канала при патологии беременности инфекционного генеза
3.4. Уровень а-дефенсинов (HNP1-3) при физиологически протекающей беременности и при патологии беременности
3.5. Динамика экспрессии гена и выработки HNP-1 нейтрофилами периферической крови in vitro
Заключение
Выводы
Практические рекмендации
Список литературы
Список сокращений
АФК - активные формы кислорода ВПГ - вирус простого герпеса ВПЧ - вирус папилломы человека ВУИ - внутриутробная инфекция ИЛ - интерлейкин ИФН - интерферон ЛПС - липополисахарид УТИ - урогенитальная инфекция ПМП - противомикробные пептиды
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в реальном времени ФНОа - фактор некроза опухоли а ЦМВ - цитомегаловирус
CD - антигенные маркеры клеток иммунной системы человека (cluster differentiation)
HBD1-6 - human beta-defensin 1-6 (бета дефенсин человека 1-6)
HNP1-4 - human neutrophil peptide 1-4 (нейтрофильный пептид человека 1-4) HD5-6 — human defensin (дефенсин человека)
IRAK - киназа, ассоциированная с рецептором ИЛ-1 (IL-lR-associated kinase) NF-цВ - транскрипционный фактор, ядерный фактор каппа В (nuclear factor-кВ) NK - естественные киллеры (natural killer)
PARs — протеазо-активируемые рецепторы
PRRs — паттерн-распознающие рецепторы (pattern recognition receptors) rTD - rhesus theta-defensin (тета-дефенсин макаки резус)
SLPI - secretory leukocyte protease inhibitor (секреторный лейкоцитарный ингибитор протеаз)
ТАК-1 - киназа, активированная трансформирующим фактором роста Р (ТФРР) TLRs - Toll-подобные рецепторы (Toll-like receptors)

Исследование экспрессии и продукции нейтрофильных пептидов НИР проведено у 5 больных сепсисом, проходивших лечение на кафедре медицины катастроф Московского государственного медико-стоматологического университета.
2.2. Схема эксперимента
На рисунке 10 представлена общая схема исследования по определению экспрессии гена НЕШ-1 клетками слизистой цервикального канала, клетками слизистой уретры мужчин и НИР-1 нейтрофилами периферической крови
Обратная транскрипция +
Полимеразная цепная реакция в реальном времени
Рис. 10. Схема эксперимента исследования уровня экспрессии генов 13-дефен сина 1 (НВО-1) и а-дефенсина 1 (НИР-1) с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.