ДНК-повреждения в формировании этанол-индуцированных пре- и постнатальных нарушений у потомства крыс и их коррекция афобазолом

• Автор: Шредер, Екатерина Дмитриевна
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 136 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Генотоксичность и ее медицинская значимость
2.2. Механизмы тератогенеза и их связь с генотоксичностыо
2.3. Этанол как тератогенный фактор
2.3.1 Потребление алкоголя и последствия влияния этанола на развивающийся плод
2.3.2. Экспериментальные наблюдения
2.3.2.1. Нейротоксичность этанола
2.3.2.2. Этанол-индуцированные поведенческие нарушения у потомства
2.4. Исследования генотоксичности этанола
2.5. Современные принципы исследования и профилактики нарушений пренатального и постнатального развития
2.5.1 Профилактика и лечение этанол-индуцированных нарушений пре- и постнатального развития и современные представления о профилактике нарушений развития
2.5.2. Антигенотоксические свойства афобазола
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Экспериментальные животные
3.2. Модель пренатальной алкоголизации, препараты и режимы введения
3.2.1. Экспериментальные группы и схемы введения
3.2.1.1. Генотоксические исследования
3.2.1.2. Эмбриотоксические исследования
3.2.1.3. Исследование поведения у потомства
3.3. Оценка генотоксических эффектов этанола в эмбриональных и плацентарных тканях крыс
3.3.1. Метод «ДНК-комет»
3.4. Исследование репродуктивной токсичности этанола
3.4.1. Оценка эмбриотоксического действия
3.4.1.1. Метод Вильсона
3.4.1.2. Метод Доусона-Петерса
3.4.2. Наблюдение за постнатальным развитием потомства
3.4.2.1. Формирование сенсорно-двигательных рефлексов
3.4.2.2. Тест «Горизонтальная веревочка»
3.4.2.3. Тест «Открытое поле»
3.4.2.4. Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт»
3.4.2.5. Т-образный лабиринт
3.4.2.6. Тест экстраполяционного избавления
3.5. Статистическая обработка результатов исследования
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Разработка модели пренатальной алкоголизации крыс
4.2. Генотоксические эффекты этанола в эмбриональной и плацентарной ткани крыс и их коррекция афобазолом
4.2.1. Этанол-индуцированные ДНК- повреждения в плацентарных клетках при 3-х и 6-часовой экспозициии и их коррекция афобазолом
4.2.2.Этанол-индуцированные «апоптотические кометы» в плацентарных клетках при 3-х и 6-часовой экспозиции и их коррекция афобазолом
4.2.3. Этанол-индуцированные ДНК- повреждения в эмбриональных клетках при 3-х и 6-часовой экспозиции и их коррекция афобазолом
4.2.4. Этанол-индуцированные «апоптотические кометы» в эмбриональных клетках при 3-х и 6-часовой экспозиции и их коррекция афобазолом
4.3. Влияние афобазола на эмбриотоксические эффекты этанола
4.3.1. Исследование костной системы плодов
4.3.2. Исследование внутренних органов плодов
4.4. Физиологическое развитие потомства крыс, подвергнутых воздействию этанола в период беременности
4.4.1. Динамика массы крысят контрольной и экспериментальных групп
4.4.2. Динамика прорезывания глаз у крысят контрольной и экспериментальных групп
4.4.3. Исследование сроков покрытия шерстью у крысят контрольной и экспериментальных групп
4.4.4. Исследование сенсорно-моторных рефлексов у крысят контрольной и экспериментальных групп
4.4.4.1. Тест «Горизонтальная веревочка»
4.4.4.2.Тест «Переворачивание на плоскости» и «избегание края»
4.5. Влияние афобазола на ориентационно-исследовательское поведение потомства крыс, подвергнутых воздействию этанола в период беременности
4.5.1. Оценка ориентационно-исследовательской деятельности в тесте «Открытое поле» на 30 день развития потомства
4.5.2. Оценка ориентационно-исследовательской деятельности в тесте «Открытое поле» на 60 день развития потомства
4.6. Влияние афобазола на уровень тревожности потомства крыс, подвергнутых воздействию этанола в период беременности
4.7. Влияние афобазола на когнитивное поведение потомства крыс, подвергнутых воздействию этанола в период беременности
4.7.1. Исследование влияния афобазола на формирование пищедобывательного навыка у крыс, подвергнутых действию этанола в период пренатального развития
4.8. Влияние афобазола на этанол-индуцированные нарушения у потомства крыс, выявляемые в условиях повышенного стресса
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. БЛАГОДАРНОСТИ

24 г/сутки для женщин и 24-32 г/сутки для мужчин (в пересчете на чистый этанол) [171].
При этом существуют данные, что в лимфоцитах хронических алкоголиков были обнаружен повышенный уровень хромосомных аберраций. В дальнейших исследованиях было выявлено, что эти возникающие хромосомные аберрации исчезают при условии воздержания от алкоголя в течение месяца и более [112, 114]. Также, доказана канцерогенность алкогольных напитков, но при этом отдельно взятый этанол канцерогеном не является [106].
На основании обобщений многочисленных исследований был сделан вывод об отсутствии надежных доказательств мутагенности этанола в соматических и генеративных клетках. Остается открытым вопрос о генотоксических эффектах этанола на эмбриональных и плацентарных клетках, а также возникновении под действием этанола первичных повреждений ДНК и их значимости в реализации тератогенных эффектов и влиянии на пренатальное и постнатальное развитие потомства [114, 171, 198].
Использование метода «ДНК-комет» [26] для проверки вовлеченности повреждений ДНК в пре- и постнатальные нарушения развития потомства, получавшего этанол в период внутриутробного развития, может привести к получению информации о потенциальном генотоксическом влиянии этанола на эмбриональные клетки. Необходимость поиска механизма действия этанола, реализующегося посредством индукции первичных повреждений ДНК, вызвана существующей возможностью исследования и профилактики подобного рода нарушений. В то же время, выяснение медицинской роли предмутационных событий в геноме является фундаментальной задачей современной фармакологии, поскольку определяет возможные мишени воздействия.
2.5. Современные принципы исследования и профилактики нарушений пренатального и постнатального развития
Современная профилактика нарушений пре- и постнатального развития, в том числе и ФАС, строятся на базовых методах исследования репродуктивной токсичности [51, 66]. В России разработаны и широко применяются для этих целей «Методические рекомендации по изучению репродуктивной токсичности фармаколо-