Защитные свойства рекомбинантного человеческого белка теплового шока (70 КДА) при экспериментальном сепсисе у крыс

• Автор: Остров, Владимир Федорович
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Старая Купавна
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список использованных сокращений

Введение

Актуальность исследования

Цель и задачи исследования

Научная новизна работы

Основные положения, выносимые на защиту

Научно-практическое значение

Объем и структура диссертации

Апробация и публикация результатов исследования

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Основные термины
1.2 Современное состояние проблемы сепсиса
1.2.1 Данные статистики
1.2.2 Недостаточность современных подходов борьбы с сепсисом
1.2.3 Заключение
1.3 Молекулярные механизмы развития сепсиса
1.3.1 Факторы патогенности бактерий
1.3.1.1 Линополисахариды грамотрицателышх бактерий
1.3.1.2 Липотейхоеяые кислоты грамположительных бактерий
1.3.1.3 Сравнение ЬРБ и ЬТА
1.3.2 Рецепторы сепсиса
1.3.2.1 Липополисахарид-связывающий белок
1.3.2.2 СБ
1.3.2.3 ТЬЛ
1.3.2.4 МИ-
1.3.3 Медиаторы сепсиса
1.4 Физиологические проявления сепсиса
1.4.1 Влияние на сердечно-сосудистую систему
1.4.1.1 Оксид азота
1.4.2 Влияние на систему гемостаза
1.4.2.1 Гиперкоагуляция
1.4.2.2 Гипокоагуляция
1.4.2.3 Фибринолиз
1.4.2.4 Белки острой фазы. Фибриноген
1.4.3 Влияние на биохимические параметры крови
1.4.3.1 Ишемия тканей. Полиорганная недостаточность
1.4.3.2 Диагностика септических состояний
1.4.3.3 Альбумин
1.4.3.4 Глюкоза
1.4.3.5 Общий белок
1.4.3.6 Креатинин
1.4.3.7 Билирубин
1.4.3.8 ТАГ
1.5 Белки теплового шока
1.5.1 Общие сведения
1.5.2 Классификация и эволюция НБР
1.5.3 Особенности активации и экспрессии генов НБР
1.6 Семейство НБР
1.6.1 Структура НБР
1.6.2 Внутриклеточные функции НБР
1.6.2.1 Участия в фолдинге, мисфолдинге и рефолдинге полипептидов

1.6.3 Внеклеточные функции Н8Р
1.6.3.1 Н8Р70 активирует неспецифический иммунитет
1.6.3.2 Роль Н8Р70 в патологических процессах
1.6.4 Защитная функция Н8Р
1. 7 Заключение по обзору литературы
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Предмет исследования
2.2 Объект исследования
2.3 Методы исследования
2.3.1 Хирургические процедуры: имплантация катетеров в сосуды
2.3.2 Катетерная технология мониторинга гемодинамики у бодрствующих
животных
2.3.3 Коагуляционный анализ
2.3.4 Биохимический анализ
2.3.5 Выживаемость животных в эксперименте и терминальные
процедуры
2.3.6 Статистический анализ данных
2.4 Протоколы исследования
2.4.1 Исследование защитных свойств гШ8Р70 при введении после РРБ на модели 73 грамотрицательного сепсиса у крыс
2.4.2 Исследование защитных свойств гШ8Р70 при введении перед ЬР8 на модели 74 грамотрицательного сепсиса у крыс
2.4.3 Исследование зависимости защитного действия от дозы гЫ18Р70 при введении 76 перед ЬР8 на модели грамотрицательного сепсиса у крыс
2.4.4 Исследование защитных свойств гШ8Р70 на модели грамположительного
сепсиса
2.4.5 Исследование фармакологического действия гЫ18Р70 на здоровых
крысах
2.4.6 Определение острой токсичности гЬН8Р
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Результаты исследования защитных свойств гЫ18Р70 при введении после ЬРБ на 81 модели грамотрицательного сепсиса у крыс
3.2 Результаты исследования защитных свойств гЫ18Р70 при введении перед ЬР8 на 90 модели грамотрицательного сепсиса у крыс
3.3 Исследование зависимости защитных свойств гЫ18Р70 от дозы вводимого
вещества па модели грамотрицательного сепсиса
3.4 Исследование защитных свойств г1гН8Р70 на модели грамположительного
сепсиса
3.5 Исследование фармакологического действия гЫ18Р70 на здоровых

3.6 Исследование острой токсичности гЬН8Р
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АТФ - аденозинтрифосфат АЧТВ - АЧТВ
ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание
КДО - 2-кето-З-дезоксиоктоновая кислота
ЛПВП — липопротеины высокой плотности
ЛПНП - липопротеины низкой плотности
ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности
мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота
ОПСС - общее периферическое сопротивление сосудов
ПВ- протромбиновое время свертывания крови
ПОН - полиорганная недостаточность
ср.АД - среднее артериальное давление
ТАГ - триацилглицериды
ЦНС - центральная нервная система
ЧСС - частота сердечных сокращений
HSP - белок теплового шока (Heat Shock Protein)
HSP70 - белок теплового шока с молекулярной массой 70 кДа IFN-y — интерферон у IL - интерлейкин
LBP - LPS-связывающий белок (LPS-binding protein)
LPS - липополисахарид (lipopolysaccharide)
LTA- липотейхоевая кислота (lipoteichoic acid)
MD-2 - миелоидный дифференциальный белок 2 (myeloid differentiation protein-2)
NF-kB -ядерный фактор связывания kappaB (nuclear factor-kappaB)
NK-клетки — клетки-киллеры (Natural Killer)
NO - оксид азота NOS - NO-синтаза
PAF - фактор активации тромбоцитов (Platelet Activating Factor)
PepG - пептидогликан
rhHSP70 - рекомбинантный человеческий белок теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (recombinant human heat shock protein)
SIRS - синдром системного воспалительного ответа (systemic inflammatory response syndrome)
SPF - свободные от патогенной микрофлоры (specific pathogen free)
TLR - толл-подобный рецептор (Toll-like receptor)
TNF-a — фактор некроза опухолей альфа

основные клинические показатели организма (Исаков Ю., Белобородова И., 2000).
Первичные или начальные этапы развития септического процесса обусловлены способностью ЬРБ и ЬТА рецептироваться различными клетками крови, в частности, тромбоцитами, макрофагами, эндотелиальными клетками, нейтрофилами, базофилами, эозинофилами, тучными клетками, гепатоцитами. Активная клеточная акцепция НРБ в организме объясняет феномен диссоциации между степенью эндотоксемии и тяжестью клинических проявлений патологии, когда при отсутствии циркулирующего токсина в крови развивается характерная картина токсикоза и шока (Шебетапп N. е1 а1., 2003).
Полисистемность и полифункциональность действия эндотоксина в организме, опосредованные комплексом цитокинов, обусловливает выраженные расстройства микроциркуляции, регионарного кровотока и системной гемодинамики с последующим развитием ПОН.
В настоящее время очевидно, что инфекция сама по себе не является непосредственной причиной комплекса разнообразных метаболических, структурных и функциональных расстройств, свойственных сепсису. Очевидно, что он представляет собой системный воспалительный ответ, индуцируемый не только комплексом токсических соединений, присущих бактериальной клетке, но и громадным количеством образующихся медиаторов воспаления в клетках различных органов и тканей, обладающих взаимопотенцирующим действием и обусловливающим полиморфизм клинических проявлений патологии.
Цитокины, будучи хемоаттрактантами, привлекают нейтрофилы и другие клетки воспаления в очаг инфекции. Эти активированные клетки выделяют протеолитические ферменты, свободные радикалы и продукты метаболизма арахидоновой кислоты, приводя к локальному повреждению эндотелия. При этом высвобождаются тканевые прокоагулянты и происходит увеличение сосудистой проницаемости («капиллярная протечка»), приводящая к перемещению жидкости из сосудистого русла в прилежащие ткани. Эта потеря