Экспериментальная фармакогенетика циклофосфамида

• Автор: Телегин, Леонид Юрьевич
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 133 с. : 22 ил.

Памяти моих родителей, Прасковьи Ивановны Полянской

и Юрия Владимировича Телегина, и рано ушедших Валентина Викторовича Рупасова, Кира Николаевича Гринберга, Владимира Георгиевича Черникова, Георгия Фёдоровича Жирнова, Бориса Константиновича Чернова, Николая Владимировича Корчагина, Марианны Викторовны Корчагиной, Татьяны Владимировны Анфаловой

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Фармакогенетика и фармакогеномика

1.2 Мыши как объект экспериментальных фармакогенетических исследований

1.3 Циклофосфамид, структура, метаболизм, некоторые аспекты фармакокинетики и фармакодинамики

1.4 Влияние циклофосфамида на иммуногенез. Чувствительность Т- и В-лимфоцитов

1.5 Мафосфамид, сарколизин, тиофосфамид, цитозинарабинозид и циклоспорин А
1.6 Биомаркёры резистентности (чувствительности) к ЦФ: ортология человек-мышь и краткая характеристика
1.7 Генетические различия у мышей в чувствительности к ЦФ.
1.8 Предпосылки для обнаружения нового механизма действия

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Животные
2.2 Антиген
2.3 Иммунодепрессанты
2.4 Метод определения антителообразующих клеток (АОК) в селезёнке мышей
2.5 Методика активации циклофосфамида in vivo
2.6 Методы исследования действия иммунодепрессантов in
vitro
2.6.1 Действие на общую популяцию клеток селезёнки мышей

2.6.2.Действие на Т- и В-клетки
2.6.3.Влияние на пролиферацию Т-клеток селезёнки
2.6.4 Оценка иммунодепрессиеного действия препаратов на лимфоциты человека
2.7. Определение фенотипа НйА (НйА-А, НйА-В и НйА-С) ЛПК исследуемых доноров
2.8. Получение цитозолей из ЛПК человека
2.9. Методы определения ферментной активности
2.9.1. Получение БЭ-фракции клеток печени и селезёнки и микросом клеток печени мышей
2.9.2. Определение относительного содержания группы изоформ цитохромов Р-450В в печени мышей
2.9.3. Определение активности алкогольдегидрогеназы (АйН)
2.9.4. Определение активности альдегиддегидрогеназы (АйИН)
2.10. Определение содержание свободных сульфгидрильных
групп
2.11. Определение акролеина
2.12. Методика определения уровня репликативного и репаратив-ного синтеза ДНК в спленоцитах мышей
2.13. Метод оценки мутагенного действия циклофосфамида, ма-фосфамида и их комбинации
2.14. Статистическая обработка результатов опытов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ОПЫТОВ
3.1. Чувствительность мышей разных линий к иммунодепрессив-ному действию циклофосфамида, сарколизина и тиофосфами-да in vivo
3.2. Чувствительность мышей BALB/c и DBA/2 к иммунодепрессив-ному действию цитозинарабинозида и циклоспорина A in

3.3. Чувствительность иммунокомпетентных клеток селезёнки к

путём конденсации cis/trans-4-ОН-ЦФ с циклогексиламмониевой солью 2-меркапто-этансульфоновой кислоты (mesna). Описание физических и токсических свойств МАФ взяты нами из сопроводительной аннотации к препарату, присланному нам компанией ASTA Medica.
Физические свойства. Белый кристаллический порошок. Температура плавления: 145-147 °С, растворимость в воде: 16 % (160 мг/мл). Рекомендуемый режим хранения - в сухом виде при + 4 °С. В биологических исследованиях необходимо использовать только свежеприготовленный раствор МАФ. В водном растворе кристаллический МАФ обратимо гидролизуется в 4-ОН-ЦФ и mesna. В течение нескольких минут устанавливается "псевдоравновесие", которое затем нарушается путём необратимой деградации 4-ОН-ЦФ в альдофосфамид, который распадается до phosphoramide mustard и акролеин. Последний образует аддукт с mesna. Кинетика гидролиза МАФ подробно описана у Niemeyer с соавт. (1989).
Токсичность. ЛД50 у крыс равна ~ 250 мг/кг при однократной внутривенной инъекции. Цитотоксическая активность in vitro составляет приблизительно 3 мкг/мл при инкубации в течение 2 часов.
Наибольшее применение в клинике МАФ было отмечено при аутологичной трансплантации костного мозга в качестве средства "очистки" (purg-
^ S-CH2-CH2-SO
Рисунок 1.10. Мафосфамид циклогексиламнн