Роль галектина-1 в механизмах дисрегуляции апоптоза и дифференцировки CD4+-лимфоцитов

• Автор: Якушина, Валентина Дмитриевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 145 с. : 12 ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Современные представления о функциях С04+-лимфоцитов

1.1.1 Функциональная активность С04+-лимфоцитов

1.1.2 Роль С04+-лимфоцитов в патогенезе аутоиммунных заболеваний

1.2 Молекулярные механизмы активации и дифференцировки С04+-

лимфоцитов

1.2.1 Молекулярные механизмы регуляции апоптотической

гибели лимфоцитов

1.3 Галектин-1: структура, функции, механизмы влияния на клетки-
мишени
1.3.1 Структура и функции галектина
1.3.2 Роль галектина-1 в регуляции иммунного ответа
1.3.3 Роль галектина-1 в патогенезе и терапии
иммуноопосредованных заболеваний
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1 Материал исследования
2.1.1 Характеристика экспериментального блока исследования
2.1.2 Характеристика клинического материала
2.2 Методы исследования
2.2.1 Выделение мононуклеарных лейкоцитов крови
2.2.2 Культивирование мононуклеарных клеток
2.2.3 Оценка количества апоптотически измененных СЭ4+-лимфоцитов
2.2.4 Исследование деполяризации митохондриальной мембраны
в лимфоцитах крови

2.2.5 Определение содержания белков Bcl-2, Вах, FoxP3, перфорина в мононуклеарных лейкоцитах
2.2.6 Оценка уровня экспрессии транскрипционных факторов дифференцировки С04+-лимфоцитов
2.2.7 Оценка содержания цитокинов в культуральных средах мононуклеарных лейкоцитов
2.2.8 Оценка содержания лимфоцитов с фенотипом Т-регуляторных клеток
2.2.9 Оценка уровня экспрессии мРНК галектина-1 в мононуклеарных лейкоцитах
2.2.10 Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1 Результаты исследования влияния галектина-1 на апоптоз С04+-лимфоцитов
3.1.1 Содержание апоптотически измененных С04+-лимфоцитов
при действии рекомбинантного галектина-1 in vitro
3.1.2 Изменение трансмембранного потенциала митохондрий лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.1.3 Содержание белков семейства Вс1-2 в мононуклеарных клетках при действии рекомбинантного галектина
3.2 Результаты исследования влияния галектина-1 на дифференцировку СЭ4+-лимфоцитов
3.2.1 Экспрессия мРНК транскрипционных факторов С04+-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.2.2 Продукция цитокинов С04+-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.3 Результаты исследования влияния галектина-1 на дифференцированные регуляторные Т-лимфоциты

3.3.1 Результаты экспериментального подбора доз рекомбинантных цитокинов для осуществления дифференцировки
С04+-лимфоцитов в Т-регуляторные клетки
3.3.2. Содержание клеток с фенотипом регуляторных 't-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.3.3 Содержание транскрипционного фактора FoxP3 в лизатах мононуклеарных лейкоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.3.4 Содержание цитолитического белка перфорина в лизатах мононуклеарных лейкоцитов при действии рекомбинантного галектина
3.4 Экспрессия мРНК галектина-1 в мононуклеарных клетках
здоровых доноров и пациентов с ревматоидным артритом
Глава 4. Обсуяедение результатов
4.1 Влияние галектина-1 на апоптоз СЭ4+-лимфоцитов
4.2 Влияние галектина-1 на дифференцировку СЭ4+-лимфоцитов
4.3 Влияние галектина-1 на дифференцированные in vitro регуляторные СБ4+-лимфоциты
ВЫВОДЫ
Список использованных сокращений
Список литературы

ацетиллактозамин-богатыми гликолипидами и гликопротеинами клеточной поверхности. Основными гликанами, специфичными для галектина-1, являются CD45, CD43, CD7, CD2, CD3, ганглиозид GM1, а также ламинин и фибронектин [Amano М. et al., 2003; Stillman B.N. et al., 2006; Earl L.A, Baum L.G., 2008; Wang J. et al., 2009]. В связи с этим, экспрессия данных гликопротеинов и профиль их гликозилирования определяют чувствительность клеток к действию галектина-1.
Профиль гликозилирования клеток определяется активностью гликозилтрансфераз, создающих или маскирующих специфические поверхностные гликаны. Так, для галектин-1-индуцированной клеточной гибели необходимо присутствие в клетке активной формы ß-l-6N-ацетилглюкозаминилтрансферазы (core-2 GCNT1). Этот фермент ответственен за образование core 2-ветвящихся О-гликанов и экспонирование поли-N-ацетиллактозаминных последовательностей, через которые галектин связывается и передает сигнал [Earl L.A. et al., 2010].
Кроме того, устойчивость Т-лимфоцитов, в частности наивных клеток, к галектину-1 может быть обусловлена увеличенной экспрессией STöGall (а2-6-сиалилтрансферазы) - фермента, осуществляющего добавление сиаловой кислоты в а2-6-положение терминальной галактозы [Toscano М.A. et al., 2007; Valenzuela H.F., et al. 2007; Zhuo Y., Beilis S.L., 2011].
Помимо внеклеточного действия рассматривается возможность галектинов регулировать активность клетки изнутри. A. Vyakamam et al. [1997] обнаружили участие галектина-1 в сплайсинге пре-мРНК [Vyakamam A. et al., 1997]. Известно, что галектины могут перемещаться из цитоплазмы в ядро или связываться с внутриклеточными везикулами при определенных условиях [Liu F.T. et al., 2002]. Внутриклеточные функции галектинов мало изучены и механизмы их реализации еще в полной мере не идентифицированы.