Влияние тиолдисульфидной системы, окислительной модификации белков на функции нейтрофилов при окислительном стрессе

• Автор: Петина, Галина Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 175 с. : 2 ил.

Оглавление
Список использованных сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современные представления о роли системы про- и антиоксидантов, окислительной модификации белков в развитии окислительного стресса
1.1. Окислительный стресс в патогенезе воспаления
1.2. Факторы цитотоксичности фагоцитов
1.3. Свободнорадикальное окисление макромолекул
1.3.1. Окислительная модификация белков
1.4. Механизмы антиоксидантной защиты
1.4.1. Ферментативные антиоксиданты
1.4.2. Неферментативные антиоксиданты
1.5. Окислительная модификация белков и состояние тиолдисульфидной системы при окислительном стрессе
Заключение
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Материал исследования
2.1.1. Клиническая характеристика пациентов с внебольничной пневмонией
2.1.2. Экспериментальный блок исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение нейтрофилов крови
2.2.2. Культивирование нейтрофилов крови
2.2.3. Определение содержания провоспалительных цитокинов
в супернатантах культур нейтрофилов крови
2.2.4. Определение активности миелопсроксидазы нейтрофилов крови
2.2.5. Определение уровня продукции гидроксильного
радикала нейтрофилами крови
2.2.6. Определение содержания восстановленного и окисленного глутатиона в нейтрофилах крови
2.2.7. Определение концентрации 8Н-групп белков в
нейтрофилах крови
2.2.8. Определение содержания белково-связанного глутатиона
в нейтрофилах крови
2.2.9. Определение активности глутагионпероксидазы в
нейтрофилах крови
2.2.10. Определение активности гиоредоксинредуктазы в
нейтрофилах крови
2.2.11. Определение содержания карбонильных производных белков в нейтрофилах крови

2.2.12. Определение концентрации белка в нейтрофилах крови
2.2.13. Определение содержания ТБК-активных продуктов в плазме крови
2.2.14. Определение содержания карбонильных производных белков плазмы крови
2.2.15. Определение содержания битирозина и окисленного триптофана в плазме крови
2.2.16. Определение активности каталазы в плазме крови
2.2.17. Определение содержания церулоплазмина в плазме крови
2.2.18. Определение концентрации общего белка в плазме крови
2.3. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Клинический блок исследования
3.1.1. Функциональное состояние нейтрофилов крови у пациентов с внебольничной пневмонией
3.1.2. Оценка параметров перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы плазмы крови у пациентов с внебольничной пневмонией
3.1.3. Состояние тиолдисульфидной системы в нейтрофилах крови у пациентов с внебольничной пневмонией
3.1.4. Окислительная модификация белков нейтрофилов и плазмы крови у пациентов с внебольничной пневмонией
3.2. Экспериментальный блок исследования
3.2.1. Функциональный статус, состояние тиолдисульфидной системы и окислительная модификация белков нейтрофилов у пациентов с внебольничной пневмонией и в условиях окислительного стресса in vitro
3.2.2. Влияние блокатора и протектора SH-групп, ингибиторов синтеза глутатиона и каталазы на функциональное состояние нейтрофилов крови у пациентов с внебольничной пневмонией и при окислительном стрессе in vitro
3.2.3. Влияние блокатора и протектора SH-групп, ингибиторов синтеза глутатиона и каталазы на состояние тиолдисульфидной системы нейтрофилов крови у пациентов с внебольничной пневмонией и при окислительном стрессе in vitro
3.2.4. Влияние блокатора и протектора SH-групп, ингибиторов синтеза глутатиона и каталазы на окислительную модификацию белков в нейтрофилах крови у пациентов с внебольничной пневмонией и при окислительном стрессе in vitro
Глава 4. Обсуждение результатов исследования
Выводы
Список литературы

Список использованных сокращений
2,4-ДНФГ - 2,4-динигрофенилгидразин
АОЗ — антиоксидантная защита
АФК — активные формы кислорода
Белок-SH - SH группы белков
Белок-SSG - белково-связанный глутатион
ВП — внебольничная пневмония
ГПО - глутатионпероксидаза
ГР - глутатионредуктаза
ГТ - глутатион-Б-трансфераза
ДИК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИЛ — интерлейкин
КАТ - кагалаза
КП - карбонильные производные
МКО - металл-катализируемое окисление
МПО - миелопероксидаза
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
НАДФ — никотинамидадениндинуклеотидфосфат
ОС - окислительный стресс
ПОЛ — перекисное окисление липидов
СОД — супероксиддисмутаза
СРО - свободнорадикальное окисление
ТБК - тиобарбитуровая кислота
ТРР — тиоредоксинредуктаза
ТХУ - трихлоруксусная кислота
ФЫО-а - фактор некроза опухоли а
АТ - 3-амино-1,2,4-триазол
В SO - бутионин-сульфоксимин
DTE — 1,4-дитиоэритритол
GSH - восстановленный глутатион
GSSG - окисленный глутатион
ЫО‘ - гидроксильный радикал
NEM — N-этилмалеимид
NF-kB - ядерный фактор kappa В
NO - оксид азота
ОСИ - гипохлорит
От’ - супероксидный анион-радикал
'Ог - синглетный кислород

et al., 1997; Curi T.C. et al., L998], Очевидно, что АФК прямо или опосредованно участвуют в механизмах развития программированной гибели клеток. Важным фактором, который может оказывать влияние на функциональную активность нейтрофилов - баланс в системе прооксиданты/антноксиданты, определяющий скорость образования и утилизации АФК [Pietarinen-Runtti Р. et al., 2000].
1.4.1. Ферментативные антиоксиданты
В процессе эволюции в клетках для защиты от АФК выработались специализированные системы ферментативных антиоксидантов, которые специфичны в отношении отдельных АФК и локализованы в определенных клеточных компартментах [Зайцев В.Г., Закревский В.И., 1998; Меньщикова Е.Б. и соавт., 2006].
В одном из немногих исследований, посвященных изучению активности ферментов АОЗ в нейтрофилах, была показана умеренная активность КАТ, Cu2+, Zn2+-3aBHCHMoft супероксиддисмутазы и отсутствие активности марганцевой формы СОД и гемоксигеназы 1 [Splettstoesser W.D., Schuff-Werner P., 2002]. Известно, что Cu2+, Ап2+-занисимая СОД и Мп2+-СОД являются преимущественно внутриклеточными ферментами, и в межклеточной жидкости быстро (в течение 5-10 минут) разрушаются [Zanma
A., 1991]. Cu2+, Zn2 -зависимая форма чувствительна к цианиду и содержится в ядре, цитоплазматическом матриксе, пероксисомах и межмембранном пространстве митохондрий клеток (Mr=31 кДа). Цианидрезистентная Мп2+-зависимая форма, локализованная преимущественно в митохондриях (Мг=40кДа) является индуцибельной: синтез фермента усиливается в ответ на образование 02" и воздействие ФНО-а [Меньщикова Е.Б. и соавт., 2006].
Показано, что активность ферментов АОЗ изменяется в ходе дифференцировки клеток. В частности, превращение моноцитов в макрофаги in vitro сопровождается увеличением активности Мп21 -СОД и снижением активности КАТ и ГПО [Nakagawara A., et al., 1981]. В клеточной линии лейкоза HL-60 в ходе дифференцировки миелоидных и моноцитарных клеток