Роль оксидативного стресса в нарушении функционально-метаболического состояния форменных элементов крови при эндотоксикозе

• Автор: Пьянов, Максим Владимирович
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 169 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ ПРИ ОТЕЧНОЙ ФОРМЕ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА

4.1. Выраженность оксидативного стресса при отечной форме острого панкреатита

3.2. Функционально-метаболическое состояние эритроцитов и тромбоцит0® при отечной форме острого панкреатита

3.3. Функционально-метаболическое состояние эритроцитов и тромбодитов-

при отечной форме острого панкреатита на фоне терапии этоксидолом.
3.4. Липидный спектр биологических мембран тромбоцитов и эритроДДтов при отечной форме острого панкреатита
3.5. Влияние этоксидола на липидный спектр тромбоцитов и эритроцитов

при отечной форме острого панкреатита
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ЭТОКСИДОЛА НА ТРОФИКУ И МЖРОЦИР1°л-ЛЯЦИЮ КИШЕЧНИКА ПРИ ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ НЕПРОХОДИМ

4.1. Выраженность оксидативного стресса при деструктивной форме остро!"

панкреатита
4.2. Функционально-метаболическое состояние эритроцитов и тромбоцитов при деструктивной форме острого панкреатита
4.3. Функционально-метаболическое состояние эритроцитов и тромбоцИД-013 при деструктивной форме острого панкреатита на фоне терапии этоксидолом

4.4. Липидный спектр биологических мембран эритроцитов и тромбоцитов при деструктивной форме острого панкреатита
4.5. Влияние этоксидола на липидный спектр эритроцитов и тромбоцитов
при деструктивной форме острого панкреатита
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПОЛ - перекисное окисление липидов;
МДА - малоновый диальдегид;
ФЛ - фосфолипаза;
ТБК - тиобарбитуровая кислота;
ДК - диеновые коньюгаты;
ОКА - общая концентрация альбумина;
ЭКА - эффективная концентрация альбумина; РСА - резерв связывания альбумина;
ИТ - индекс токсичности плазмы;
МСМ - молекулы средней массы;
СЖК - свободные жирные кислоты;
СФ - суммарные фосфолипиды;
МАГ - моноацилглицеролы;
ДАТ - диацилглицеролы;
ТАГ - триацилглицеролы;
ЭХЛ - эфиры холестерола;
ХЛ - холестерол;
ЛФ - лизофосфолипиды;
СМ - сфингомиелин;
ФХ - фосфатидилхолин;
ФС - фосфатидилсерин;
ФИ -фосфатидилинозит;
ФЭ - фосфатилдилэтаноламин.

лаждали, приливали 4 мл н-бутанола, встряхивали и центрифугировали 15 минут при 1500 g. В верхней бутанольной фазе регистрировали спектр поглощения в области 515-550 нм. Определяли оптическую плотность при 532 нм, используя в качестве базовых точки спектра при 515 нм и 550 нм (Егоров Д.Ю., Козлов A.B., 1988). Концентрацию ТБК - реактивных продуктов выражали в.нмоль МДА на 1 грамм белка, где коэффициент молярной экстинции комплекса МДА-ТБК, равен 1,56. Содержание ТБК - реагирующих продуктов выражали в нмоль/г белка.
3. Определение активности фосфолипазм А
Проводили солюбилизацию мембранных белков форменных элементов с использованием 1%-ного раствора тритон Х-100. Для этого к образцам предварительно выделенных форменных элементов крови прибавляли 0,5 мл 10 мМ раствора трис-HCL - буфера с 1 % тритон Х-100 (15 мМ), рН=8,0. Для наиболее полного извлечения белков образцы гомогенизировали с помощью стеклянного гомогенизатора со шлифованным пестиком при температуре 37 °С в течение 10 минут. С целью ингибирования сериновых протеаз в гомоге-наты добавляли фенилметансульфонилфторид (10 мкМ). Для определения активности фермента к 1 мл ферментного препарата прибавляли 1 мл ЮмМ трис-HCL - буфера (рН=8,0), содержащего 150 мМ тритон Х-100, 10 мМ СаС12 и субстрат (1,2 мМ).
В. качестве субстрата использовали экстрагированные фосфатидилхо-лины яичного желтка, для получения которых к 1 мл тканевого гомогената яичного желтка добавляли 3,75 мл хлороформ-метаноловой смеси 1:2 по объему, тщательно перемешивали, охлаждали в холодильнике в течение 2-3 часов, встряхивая каждые 20-30 минут. Затем смесь центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 минут. Полученный супернатант переносили в другую пробирку, а к оставшемуся осадку в первой - приливали 4,75 мл хлороформ-метаноловой смеси, содержащей 1 часть хлороформа, 2 части метанола и 0,8 частей воды. Проводили повторную экстракцию липидов, центрифугирование и объединение супернатантов. Затем выполняли промывку и разде-