Молекулярные механизмы цитокинопосредованной дизрегуляции апоптоза лимфоцитов крови

• Автор: Савельева, Ольга Евгеньевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 215 с. : 31 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Современные представления о функционировании системы цитокинов
1.2 Роль цитокинов в регуляции апоптоза
1.3 Механизмы нарушения цитокин-опосредованного апоптоза и
их роль в патогенезе различных заболеваний
1.4 Апоптоз - новая мишень для коррекции патологических состояний
Заключение
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1 Материал исследования
2.1.1 Характеристика экспериментального материала
2.1.2 Клиническая характеристика пациентов
с клещевым энцефалитом
2.2 Методы исследования
2.2.1 Выделение лимфоцитов крови
2.2.2 Культивирование лимфоцитов крови для изучения проапоптотических эффектов цитокинов
2.2.3 Культивирование лимфоцитов крови для изучения антиапоптотических эффектов цитокинов
2.2.4 Культивирование лимфоцитов крови для клинического блока исследований
2.2.5 Оценка реализации апоптоза лимфоцитов крови методом проточной лазерной цитофлюориметрии
2.2.6 Регистрация изменения величины мембранного потенциала митохондрий лимфоцитов крови
2.2.7 Оценка уровня активных форм кислорода в лимфоцитах крови методом проточной цитофлюориметрии
2.2.8 Приготовление клеточных лизатов для проведения вестерн-блоттинга
2.2.9 Определение содержания факторов транскрипции и белков-регуляторов апоптоза в лимфоцитах крови методом вестерн-блоттинга

2.2.10 Оценка концентрации IL-2 в супернатантах культур лимфоцитов крови
2.2.11 Оценка концентрации фактора некроза опухолей альфа и интерлейкина-4 в супернатантах культур лимфоцитов крови
2.2.12 Определение концентрации IL-10 и IL-12 в супернатантах культур лимфоцитов крови
2.2.13 Оценка количества лимфоцитов крови, несущих на своей поверхности рецепторы к фактору некроза опухоли альфа I
типа, интелейкинам-2, -4, -10, -
2.2.14 Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1 Особенности реализации программированной гибели лимфоцитов крови при действии рекомбинантных цитокинов
3.1.1 Дозозависимые эффекты in vitro рекомбинантных форм фактора некроза опухолей альфа, интерлейкина-2 и интерлейкина-4 в отношении лимфоцитов крови
3.1.2 Молекулярные механизмы цитокиновой регуляции апоптоза лимфоцитов крови
3.1.2.1 Изменения количества клеток со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и особенности продукции активных форм кислорода лимфоцитами в условиях культивирования с рекомбинантными цитокинами in vitro
3.1.2.2 Уровень белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в лимфоцитах крови в условиях культивирования с рекомбинантными цитокинами in vitro
3.1.2.3 Содержание транскрипционных факторов NF-kB, р53, pRb и ингибитора циклинзависимых киназ p2lWAF1/c,pl в лимфоцитах крови в условиях культивирования с рекомбинантными цитокинами in vitro
3.2 Особенности реализации апоптотической гибели лимфоцитов крови в условиях различной продукции эндогенных цитокинов на клинической модели клещевого энцефалита
3.2.1 Состояние системы Thl- и Т112-цитокинов и их
рецепторов при клещевом энцефалите
3.2.2 Изменения количества апоптотических лимфоцитов, а также лимфоцитов со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и особенности внутриклеточной продукции активных форм кислорода при клещевом энцефалите
3.2.3 Содержание белков-регуляторов апоптоза семейства Вс
в лимфоцитах крови при клещевом энцефалите

3.2.4 Уровень факторов транскрипции ИР-кВ и р53 в лимфоцитах крови при клещевом энцефалите
Глава 4. Обсуждение результатов исследования
4.1 Молекулярные механизмы регуляции апоптоза лимфоцитов
крови рекомбинантными Т№а, 1Ь-2 и 1Ь-
4.2 Молекулярные механизмы регуляции апоптоза при дисбалансе ^ ТЫ - и ТЬ2-цитокинов (на модели клещевого энцефалита)
Заключение
Выводы
Список литературы

межнуклеосомную фрагментацию ДНК [Фильченков A.A., 2003; Мойбенко,
A.A. и соавт., 2005]. Кроме того, каспаза-8 вызывает выход из лизосом активного катепсина В, который затем частично расщепляет цитозольный белок Bid, переводя его в активное состояние, что способствует частичному расщеплению другого проапоптозного белка - Вах. Последний, взаимодействуя с митохондриальным белком порином, образует во внешней мембране канал, по которому в цитоплазму выходят цитохром с и апоптоз-индуцирующий фактор (AIF) [Bagci E.Z. et al., 2006] (рис. 3). Помимо этого, в роли адаптерного протеина может выступать RAIDD (receptor interacting protein-kinase 1 domain containing adapter with death domain), который, связываясь с доменом RIP (receptor-interacting protein) и с участком прокаспазы-2, также может индуцировать апоптоз [Ahmad М. et al., 1997; Zhang H. et al., 2008].
Возможна инициация других TNF-RI-опосредованных внутриклеточных реакций, когда TRADD взаимодействует с иными белковыми структурами, а именно, с TRAF-2 и обладающим киназной активностью RIP, которые инициируют пути, защищающие клетку от гибели. Данные механизмы обусловлены активацией ядерного транскрипционного фактора NF-kB и NF-kB-зависимой экспрессии антиапоптотических протеинов, таких как белки семейства ингибиторов апоптоза (inhibitors of apoptosis protein, IAP) IAP-1 и IAP-2 [Perkins N.D, 2007], TRAF-1 и TRAF-2 [Baldwin A.S., 1996; Li X. et al., 2006], FLIP (Fas-associated death domain-like interleukin- lß-converting enzyme-inhibitory protein), угнетающего активность каспазы-8 [Micheau О. et al., 2001], A20 [Opipari A.W. et al., 1992] и Bcl-xL [Skommer J. et al., 2007]. Интересен факт «круговой» взаимосвязи TRAF-2 и IAP-белков. С одной стороны, TRAF-2 стимулирует синтез данной группы ингибиторов, а, с другой, - образование, стабильность и функционирование TRAF-2 в высокой степени зависит от действия одного из членов семейства IAP-1 [Li X. et al., 2006].