Роль ВИЧ-1 белка Nef в цитокин-индуцированной репликации вируса и регуляции апоптоза лимфоцитов при ВИЧ-инфекции

• Автор: Иванкова, Анна Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 120 с. : 25 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СВОЙСТВАХ ВИЧ-1 БЕЛКА NEF, ЕГО РОЛИ В ПАТОГЕНЕЗЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. ВИЧ-1 и его белки. Структура и основные функции ВИЧ-1 белка

1.2. Клеточные эффекты белка Nef
1.3. Современные представления об основных типах клеточной
смерти, их значимость при ВИЧ-инфекции
1.4. Влияние ВИЧ-1 белка Nef на апоптоз CD4+ Т-лимфоцитов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика объекта и предмета исследования
2.2. Выделение и культивирование лимфоцитов периферической
крови
2.3. Культивирование лимфоцитов периферической крови, инфицированных BH4-l(Nef+) и ВИЧ-1 Дне/(Nef-)
2.4. Изучение репликации ВИЧ-1 (Nef+) и ВИЧ-1 Дне/(Nef-) in vitro
2.5. Определение количества продуктивно инфицированных ВИЧ-1 (Nef+) и ВИЧ-1 Anef (Nef-) лимфоцитов in vitro
2.6. Исследование активационного статуса лимфоцитов
2.7. Исследование апоптоза лимфоцитов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3 Л. Влияние ВИЧ-1 белка Nef на регуляцию процесса репликации
ВИЧ-1 в присутствии цигокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) in
vitro
3.2. Влияние ВИЧ-1 белка Nef на активационный статус инфицированных Лф в присутствии цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) in vitro
3.3. Взаимосвязь между процессами активации инфицированных ВИЧ-1 (Nef+) и ВИЧ-1 Але/(Nef-) Лф и репликацией ВИЧ-1 in
vitro
3.4. Влияние ВИЧ-1 белка Nef на регуляцию процесса апоптоза лимфоцитов в присутствии цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО- а) при инфицировании клеточных культур in vitro ВИЧ-1 (Nef+) и
ВИЧ-1 Anef (Nef-)
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ОСНОВНОЙ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
AT — антиген
АПК — антиген-представляющие клетки
ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека 1 типа
ВИО - вирус иммунодефицита обезьян
ДК — дендритные клетки
ИЛ - интерлейкин
ИФН-у - интерферон-гамма
КСФ-ГМ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор Лф - лимфоциты
мкАТ - моноклональные антитела
Мкл - микролитр
Мл - миллилитр
Нг - нанограмм
Пкг - пикограмм
ФНО-а - фактор некроза опухолей-альфа
ФС - Фосфатидилсерин
A1CD - активационно-индуцированный апотоз (activation-induced
cell death)
AnnV-FITC - белок аннексии 5 конъюгированный с флуорохромом FITC В-Лф - В-лимфоциты
CD - группа дифференцировки
БЮСб — флуорохром дигексилокарбоцианина йодид
FITC - флуорохром флуоресцеин изотиоцианат
Ig - иммуноглобулины
LCK - лейкоцитарно-специфическая киназа
LTR - длинный терминальный повтор (Long terminal repeat)

этого происходит повреждение структуры цитохрома и высвобождение его из митохондрий, что, в свою очередь, активирует каспазу-3 [36].
In vitro было продемонстрировано разрушающее действие оксида азота на клеточную ДНК [26]. С другой стороны, имеются данные об антиапоптозном действии оксида азота. Согласно этим исследованиям, оксид азота стабилизирует каспазы, препятствуя их активации и блокируя Fas-индуцированный путь развития апоптоза [81].
Несмотря на то, что ключевая роль апоптоза в реализации физиологических процессов, связанных с поддержанием клеточного гомеостаза, не вызывает сомнений, показано, что алоптоз не является обязательной составляющей в реализацию большинства типовых патологических процессов. [11]. В этом можно убедиться на примере воспалительной реакции [13, 26]. Хотя для воспаления характерно повреждение тканей, гибель клеток при этом происходит преимущественно по механизму некроза и сопровождается выходом содержимого клеток в межклеточное пространство, что может стать причиной гибели соседних клеток и расплавления тканей. Однако на завершающих этапах воспаления апоптозу принадлежит важная роль, поскольку в этот период происходит устранение активированных клеток иммунной системы, выполнивших свои функции. То же относится к аллергическому воспалению, при котором упомянутая элиминация эффекторных клеток к тому же затруднена в связи с их способностью к самоподдержанию благодаря выработке аутокринных цитокинов (так, активированные эозинофилы секретируют КСФ-ГМ, защищающий от апоптоза) [13].
При инфекционных процессах развитие апоптоза зависит от конкретных факторов, выделяемых микроорганизмами (суперантигены -экзотоксины часто выступают в качестве индукторов активационного апоптоза) и не определяется инфекционным патологическим процессом как таковым [11].