Клинико-морфологическая характеристика фибриллярного гломерулонефрита

• Автор: Бочарникова, Анна Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 85 с. : 29 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Общая характеристика клинических наблюдений
2.2 Гистологическое и гистохимическое исследование
2.3 Иммунофлуоресцентного исследование
2.4 Иммуногистохимическое исследование
2.5 Электронная микроскопия
2.6 Статистический анализ
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБ-
3.1 Общая характеристика наблюдений ФГН
3.2 Характеристика клинических данных
3.2 Результаты морфологического исследования ФГН
3.3 Результаты иммунофлуоресцентного исследования ФГН
3.4 Результаты электронной микроскопии ФГН
3.5 Результаты иммуногистохимического исследования ФГН
СУЖДЕНИЕ

Глава IV. ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ИЛЛЮСТРАЦИИ

Список принятых сокращений
ФГН - Фибриллярный гломерулонефрит ММП — Матриксные металлопротеиназы
ТИМГТ - Тканевые ингибиторы матриксных металлопротеиназ
ИТН — Иммунотактоидная нефропатия
Ig - Иммуноглобулин
ГН - Гломерулонефрит
ИЛ-2 - Интерлейкин
ИЛ-1Р - Интерлейкин-1Р
HLA-ДНК — Генотип главного комплекса тканевой совместимости человека
Ag2+ - Ион серебра
CB6F1 - Носитель гена c-Ha-ras
c-Ha-ras - Протоонкоген
DRp 17.2 - Подтип аллеля DR3
ЦИК - Циркулирующие иммунные комплексы
БМК - Базальная мембрана клубочка
ТФР р - Трансформирующий фактор роста р
ВКМ - Внеклеточный матрикс
ТИФ - Тубулоинтерстициальный фиброз
МТ - Матриксные металлопротеиназы мембранного типа
PBS - Фосфатно-солевой буфер
ЦПАО - Централизованное патологоанатомическое отделение ФСГС - Фокальный сегментарный гломерулярный склероз Са2+ - Ион кальция
А - Лямбда легкие цепи иммуноглобулина G К- Каппа легкие цепи иммуноглобулина G ДАБ — 3,3'диаминобензидин

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Фибриллярный гломерулонефрит (ФГН) - заболевание из группы гломерулярных болезней с отложением организованных депозитов [36]. Впервые его описали Е. Rosenmann и М. Eliakim в 1977 году [56]. Диагноз ставится исключительно с помощью электронной микроскопии при обнаружении депозитов, состоящих из хаотично расположенных «фибрилл», имеющих просвет, который определяется при увеличении от 30 ООО, т.е. при наличии тубулярных структур (микротубул) [42]. Окраска конго-красным всегда отрицательная. Многие авторы, изучающие феномен ФГЕ1, отмечают крайне неблагоприятный прогноз заболевания: развитие терминальной стадии почечной недостаточности в течение нескольких лет после постановки диагноза практически у половины пациентов [36,10,39]. Этиология заболевания неизвестна, патогенез не изучен и, как следствие, нет единой обоснованной тактики лечения. Хочется отметить, что помимо взрослого населения ФГН страдают дети [46,15,22,60,62]. К настоящему времени в литературе накопилось достаточное количество публикаций, посвященных ФГН (как описаний отдельных случаев, поступающих из разных стран [22,15,46,33,45,50,16,40], так и клинико-морфологических исследований [38,53,17,26,49,57,28]). Что свидетельствует об интересе к проблеме ФГН. К сожалению, попытки определения биохимического состава микротубул при ФГН были предприняты лишь единичными группами исследователей [55,66,59]. Немногочисленные серийные исследования случаев ФГН, как правило, носят описательный характер. Несомненно, открытие биохимического состава микротрубочек при ФГН позволило бы приблизиться к разгадке патогенеза заболевания и выработать единую терапевтическую тактику.
Из цитологии известно, что микротрубочки являются обычным компонентом клеток эукариотов. Стенка микротрубочек состоит из полимеризо-ванных молекул белка тубулина и ассоциированных белков (наружный диа-

2.3 Иммуноморфологическое исследование.
Иммуноморфологическое исследование выполнено на материале парафиновых срезов пункционных биопсий больных ФГН. Срезы толщиной 2-3 мкм помещали на адгезивные стекла Menzel-Glaser (Германия), которые далее высушивали в течение 1 часа при температуре 37 С. Срезы подвергали депарафинации в ксилоле, проводили по спиртам нисходящей концентрации (96-70) до воды.
ПРОТОКОЛ прямого иммунофлуоресцентного метода.
1. Приготовление рабочего раствора протеиназы К и нагревание его до 37С.
2. Демаскировка антигенов протеиназой К в течение 11 минут при температуре 37С.
3. Остановка ферментативной реакции в холодной проточной воде - 2-3 минуты.
4. Поласкание в натрий-фосфатный буфер (PBS - Phosphate buffered saline).
5. Промывание в 2-х сменах PBS по 5 минут
6. Инкубация с антителами - 30 мин при температуре 37С (в темноте). Характеристика и разведение антител приведены в таблице 1.
7. Промывание в 2-х сменах PBS по 5-10 минут
Таблица 1. Характеристика антител для иммунофлюоресцентного исследования.
Антитело характеристика разведение
IgA Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0204), Германия 1:20
IgM Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0203), Германия 1:20
IgG Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0202), Германия 1:30
Карра Light Chains Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0198), Германия 1:20
Lambda Light Chains Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0199), Германия 1:20
Fibrinogen Polyclonal rabbit anti-human Dako (F 0111), Германия 1:20