Оценка влияния генно-инженерно-модифицированных источников пищи на репродуктивную систему крыс и их потомство

• Автор: Утембаева, Назым Талгатовна
• Шифр специальности: 14.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 86 с. : 12 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. Введение
2. Обзор литературы
2. ГМО растительного происхождения: производство и оценка безопасности,
2.1.1. Мировое производство и перспективы использования
ГМО растительного происхождения
2.1.2. Принципы оценки безопасности ГМО растительного происхождения
2. Репродуктивная система млекопитающих
2.2.1. Характеристика репродуктивной системы
2.2.2. Влияние алиментарных и токсических факторов
на репродуктивную систему
3. Экспериментальная часть
3. Материалы и методы

3.1.1. Гигиеническая характеристика исследуемых образцов ГМО растительного происхождения и его традиционного аналога
3.1.2. Экспериментальные животные
3.1.3. Экспериментальные рационы
3.1.4. Методы оценки функции репродуктивной системы
3.1.4.1. Генеративная функция гонад
3.1.4.2. Пренатальное развитие потомства
3.1.4.3. Постнатальное развитие потомства
3.1.5. Методы статистической обработки данных
3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
3.2.1. Разработка алгоритма исследований репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения

3.2.2. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату
аммония, на генеративную функцию крыс
3.2.2.1. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на фертильность крыс БО-П
3.2.2.2. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на эндокринную функцию гонад крыс БО-П
3.2.3. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату
аммония, на пренатальное развитие потомства
3.2.3.1. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на пренатальное развитие потомства Н
3.2.3.2. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на пренатальное развитие потомства Б
3.2.4. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату
аммония, на постнатальное развитие потомства
3.2.4.1. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на постнатальное развитие потомства И
3.2.4.2. Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на постнатальное развитие потомства Р
4. Заключение
5. Выводы
6. Внедрение в практику
7. Список литературы
1. ВВЕДЕНИЕ
Практическое применение новых способов трансформации генома растений повлекло за собой потребность в строгой регламентации процесса оценки безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов (ГМО) растительного происхождения, предназначенных для использования в пищу. Разработка системы оценки безопасности ГМО, действующей в настоящее время в Российской Федерации, была начата в 1995-1996 г.г. Данная система не только аккумулирует весь отечественный и зарубежный опыт, но и включает новейшие научные подходы, основанные на достижениях современной фундаментальной науки: геномный и протеомный анализ, выявление повреждений ДНК и мутагенной активности, выявление продуктов свободнорадикальной модификации ДНК и других чувствительных биомаркеров [10, 42, 57, 58, 92, 98, 124, 125, 141].
Оценка безопасности ГМО проводится на этапе государственной регистрации. Государственной регистрации подлежат новые пищевые продукты, полученные из ГМО растительного происхождения, изготовленные в Российской Федерации, а также пищевые продукты, полученные из ГМО растительного происхождения, ввоз которых на территорию Российской Федерации осуществляется впервые [11, 25]. В системе медико-биологических исследований безопасности ГМО, наряду с общетоксикологическими исследованиями, важное место принадлежит изучению специфических видов токсичности в экспериментах in vivo. В соответствии со сложившейся исследовательской практикой используется комплексный подход, предоставляющий наиболее полную и достоверную информацию о потенциальном генотоксическом, иммунотоксическом и аллергенном действии ГМО, а также позволяющий выявить возможные незаданные эффекты генетической модификации [10, 15, 26, 27, 33]. При необходимости, в случае выявления существенных изменений генома, протеома и метаболома ГМО, могут быть проведены дополнительные исследования: влияние на репродуктивную функцию,
гонадотоксическое, эмбриотоксическое, тератогенное действие; влияние на продолжительность жизни, и др. [25].
Анализ данных научной литературы показывает, что изучение
репродуктивной токсичности является одним из интегральных критериев при
гигиенической оценке факторов окружающей среды, так как сложность феномена
репродукции делает его уязвимым для неблагоприятных воздействий на любом
этапе реализации функции. Серьезным ограничением использования методов
оценки репродуктивной токсичности является их продолжительность и

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Подготовка материала для исследования За 12 часов до эвтаназии животных лишали пищи. Отбор крови производили из сосудов шеи в пробирки «Vacuette» для клинических исследований сыворотки крови с активатором образования сгустка (производства «Greiner Bio-one», Австрия). Цельную кровь центрифугировали 20 мин. при скорости 2500 об/мин на центрифуге «Опн-ЗМ». Сыворотку крови разливали по 0,50 мл в пластиковые микропробирки «Eppendorf» и хранили при -20 °С для иммуноферментных исследований. Содержание прогестерона и эстрадиола определяли в сыворотке крови беременных самок (20-й день беременности), содержание тестостерона - в сыворотке крови самцов (возраст -90-100 дней).
Яичники и семенники измельчали путем продавливания через перфорированную пластину из нержавеющей стали (диаметр отверстий 0,5 мм). Полученную массу переносили в стеклянный гомогенизатор Потгера-Эльвейема с тефлоновым пестиком (зазор 0,2 мм), «Polymix PX-OS 2000», и гомогенизировали при 2000 об/мин в течении 60 сек. В качестве среды выделения использовали 1-кратный фосфатно-солевой буфер. Конечное разведение гомогенатов соответствовало ОД : 1,5 (масса, г : объем, мл).
Определение содержания эстрадиола Содержание эстрадиола определяли методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы фирмы «Diagnostics Biochem Canada Inc.» (кат. № CAN-E2-430).
Метод прямого количественного определения эстрадиола в сыворотке основан на конкуренции между свободным и адсорбированным на поверхности лунок планшета эстрадиолом за активные центры связывания аффинных антител, меченых биотином. Немеченый антиген, присутствующий в образцах, контролях и стандартах, и меченый антиген (конъюгат) во время инкубации конкурируют за ограниченное количество сайтов связывания антител, иммобилизованных в лунках микропланшета. После промывки добавляли ферментный субстрат; энзиматическую реакцию останавливали добавлением стоп-раствора. Интенсивность окрашивания, сформировавшегося в ходе энзиматической реакции, обратно пропорциональна концентрации эстрадиола в образце.