Молекулярно-генетические аспекты терапевтической резистентности у больных бронхиальной астмой

• Автор: Миронова, Жанна Александровна
• Шифр специальности: 14.01.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 234 с. : 17 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Бронхиальная астма - мультифакторное заболевание.

Г енетические и фармакогенетические аспекты Б А

1.2. Фенотипы бронхиальной астмы тяжелого течения.

Терапевтически резистентная БА

1.3. Механизмы действия ГКС. Структура глюкокортикоидного рецептора

1.4. Молекулярные механизмы развития стероидорезистентности.

Роль изоформ ГР в развитии стероидорезистентности
1.5. Ген глюкокортикоидного рецептора N113С
1.6. Структура и функции бета2-адренорецептора. Ген АІЖВ2
1.7. Г ен множественной лекарственной устойчивости МЕЖІ
1.8. Роль цитокинов в персистенции воспаления при БА. Гены 1Ь4 и

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клиническая характеристика обследованных лиц
2.1.1. Клиническая характеристика больных БА в зависимости от
степени тяжести заболевания
2.1.2. Клиническая характеристика больных ТРБА и ТЧБА
2.1.3. Клиническая характеристика больных ИФА
2.2. Лабораторные и инструментальные методы
2.3. Молекулярно-генетические методы
2.3.1. Характеристика исследованных генетических вариантов
2.3.2. Выделение геномной ДНК из крови пациентов
2.3.3. Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ

2.3.4. Выделение общей РНК из крови пациентов
2.3.5. Реакция обратной транскрипции и полимеразная цепная реакция
в режиме реального времени
2.4. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Распределение аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МЕШ; 01у16Аги и 01п27С1и гена А01Ш2; С-589Т гена 1Ь4; А^ЗОСЬ гена 1ЫЗ; N3638,1ШК, Ие559Азп, Уа172911е
и 11е747Ме1 гена N11301 в обследованных группах
3.1.1. Распределение аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена М0111; 01у16Агв и 01п2701и гена А01Ш2; С-589Т гена 1Ь4; Argl30Gln гена 1Ь13; N3638, Ы23К, 11е559Азп, Уа172911е
и 11е747Ме1 гена ЫЮС1 в группе контроля
3.1.2. Распределение аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МИШ; ®у16А^ и С1п27С1и гена А1ЖВ2; С-589Т гена 1Ь4; Ащ130О1п гена 1ЫЗ; N3638,1123К, 11е559Азп, Уа172911е и 11е747Ме1 гена ЫКЗС1 у больных БА в зависимости от степени тяжести заболевания по сравнению с группой контроля
3.1.3. Распределение аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МИШ; ®у16Аг8 и ап2701и гена А01Ш2; С-589Т гена 1Ь4; Агё130®п гена 1ЫЗ; N3638, К23К, Ие559Азп, Уа172911е и Не747Ме1 гена N113 С1 у больных ТРБА и ТЧБА по сравнению с группой контроля
3.1.4. Распределение аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МЕШ, -С589Т гена 1Ь4 и Аг§13(Ю1п гена ПЛЗ у больных ИФА по сравнению с группами Б А и контроля
3.2. Ассоциации аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МЕШ; ®у16Агё и С1п27С1и гена А1ЖВ2; С-589Т гена 1Ь4; А^13(Ю1п гена 1Ь13; N3638 и 1Е23К гена NRЗC1, с

фенотипами Б А
3.2.1. Ассоциации аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена М1Ж1; С1у16Агё и 01п2701и гена АББ®2; С-589Т гена 1Ь4; А^ШИл гена 1ЫЗ; N3638 и Л23К гена>ШС1, со степенью тяжести Б А
3.2.2. Ассоциации аллельных вариантов, обусловленных мутациями С3435Т гена МОЮ; С1у16Л^ и ап2701и гена А1ЖВ2; С-589Т гена 1Ь4; Аг§130Оп гена ПЛЗ; N3638 и Л23К гена N11301, с фенотипами больных ТРБА и ТЧБА
3.3. Экспрессия изоформ глюкокортикоидного рецептора у больных
БА в зависимости от степени тяжести заболевания
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

По результам исследований, в эпителиальных клетках респираторного тракта человека (BEAS-2B, А549) и слизистой оболочке носа экспрессия мРНК ГРа в 2 800 раз больше, чем мРНК rPß. Отмечено, что ГКС в два раза уменьшают период полужизни белка ГР (Pujols L., MullolJ., Perez М. et al., 2001).
Белок TPß присутствует не только в ядре, но и в цитоплазме. Кроме того, следует упомянуть также об особой форме ГР, расположенной на клеточной мембране. Предполагалось, что клетки, несущие на своих мембранах ГР, более восприимчивы к ГКС. Данный вариант ГР экспрессируется у стероидочувствительных пациентов с лейкозом. Экспрессия мембранных ГР коррелировала со степенью ГКС-опосредованного апоптоза лейкоцитов in vitro. С появлением высокочувствительных иммунологических методов, мембранные ГР были выявлены и у здоровых людей (Gametchu В., Watson C.S., 2002).
В 2007 году впервые было показано, что TPß обладает самостоятельной транскрипционной активностью, изменяя работу более 5 тысяч генов (Lewis-Tuffin L.J., Jewell С.М., Bienstock RJ. et al., 2007).
Вариабельность экспрессии изоформ ГРа и EPß зависит от возраста обследуемых лиц. У практически здоровых людей молодого возраста наблюдается более высокая экспрессия ГРа, чем TPß. В исследовании, проведенном на группе практически здоровых лиц, не было выявлено корреляции между соотношением ГРа/TPß и дозами дексаметазона, необходимыми для подавления кортизола плазмы, а также с аффинностью ГР. Вариабельность чувствительности к ГКС, которая наблюдалась у здоровых лиц, по мнению авторов, не могла быть связана с изменением экспрессии ГРа и TPß (Colli L.M., do Amaral F.C., Torres N. et al., 2007).
В отсутствии лиганда ГР неактивен и располагается в цитоплазме, образуя комплекс с несколькими «белками теплового шока» (heat shock protein): hsp90, hsp70, hsp56, hsp40, а также с иммунофилином p59, фосфопротеинами p23, рбО, FK-связывающим белком (FKBP). Центральную роль в этом комплексе играет