Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лазатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом

• Автор: Кукушкина, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.22
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Волгоград
• Количество страниц: 217 с. : 13 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ПУРИНОВЫЙ МЕТАБОЛИЗМ:.........................МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ

Глава 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Выделение клеток крови и приготовление их лизатов

3.2. Определение активности гуаниндезаминазы

3.3. Определение активности гуанозиндезаминазы.

3.4. Определение активности пуриннуклеозидфосфо-рилазы
3.5. Определение активности гуанозинфосфорилазы ... Глава 4. АКТИВНОСТЬ ЭНЗИМОВ В КРОВИ ЗДОРОВЫХ
ЛЮДЕЙ
Глава 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭНЗИМНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ У
БОЛЬНЫХ РА
5.1. Энзимные показатели крови у больных РА всей группы
5.2. Энзимные исследования у больных РА с I степенью активности процесса
5.3. Энзимные исследования у больных РА с II степенью активности процесса
5.4. Энзимные исследования у больных РА с III степенью активности процесса

Глава 6. СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭНЗИМОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РА, ПОДАГРОЙ И ОА
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АДА аденозиндезаминаза
АНФ антинуклеарный фактор
АС анкилозирукмций спондилоартрит
БПТ быстро прогрессирующее течение
ГГФРТ гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансфераза
ГДА гуаниндезаминаза
ГЗДА гуанозиндезаминаза
ГФ гуанозинфосфорилаза
КО ксантиноксидаза
мк мочевая кислота
мпт медленно прогрессирующее течение
мэ меркаптоэганол
НК нуклеиновые кислоты
5'-НТ 5'-нуклеотидаза
ОА остеоартроз
пм пуриновый метаболизм
пн пуриновые нуклеотиды
Г1НФ пуриннуклеозидфосфорилаза
ПсА псориатический артрит
РА ревматоидный артрит
РФ ревматоидный фактор
СКВ системная красная волчанка
соэ скорость оседания эритроцитов
СРБ С-реактивный белок
сед системная склеродермия
ФК функциональный класс
ФРПФ-синтетаза фосфорибозилпирофосфат-синтетаза
ЦИК циркулирующие иммунные комплексы
Глава 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Все энзимные исследования проводились в лизатах эритроцитов, лимфоцитов и плазме крови, получаемой из локтевой вены у больных и здоровых лиц в утренние часы до приема пищи.
3.1. Выделение клеток крови и приготовление их лизатов
Вся используемая для выделения клеток крови стеклянная посуда (пробирки, пипетки, меланжеры) предварительно силиконируется для предотвращения прилипания клеток к поверхности стекла. С этой целью посуда помещалась на 10-12 секунд в 1% раствор силикона (дихлорметилси-лан ПМС-500), затем ее 5-6 раз ополаскивали дистиллированной водой и высушивали в сухожаровом шкафу при температуре 100-120°С. В качестве антикоагулянта использовался 3,8% раствор цитрата натрия из расчета 0,1 мл на 1 мл крови. Венозная кровь в объеме 5 мл помещалась в силико-нированную пробирку с 0,5 мл цитрата натрия (предварительно смочить цитратом внутренние стенки пробирки). Затем в пробирку с кровью добавлялся равный объем 0,9% раствора хлористого натрия и все тщательно перемешивалось. Выделение лимфоцитов проводили по методу, предложенному Boyum (1980) с использованием лимфосепа (фирма «JCN Biomedicals») с плотностью 1,077-1,079 г/мл (108, 109). Далее в центрифужную пробирку помещается 3 мл лимфосепа и в нее осторожно по стенке наслаивается 5 мл венозной крови с физраствором. Соотношение кровь : лимфосеп может колебаться от 1:2 до 1:4. Затем проводится центрифугирование при 2000 об/мин в течение 20 минут, за которые эритроциты оседают на дне пробирки, над ними — слой лимфосепа, а затем — слой плазмы. Между слоями плазмы и лимфосепа должна четко контурироваться граница (интерфаза), представляющая собой белесоватое кольцо, содержащее лимфоциты. Далее с помощью пастеровской пипетки с загнутым кончиком осторожно извлекаются лимфоциты из интерфазы в количестве