Анализ мутаций в генах FLT3, KIT, MLL, NPMI у детей с острым миелоидным лейкозом

• Автор: Гук, Лариса Викторовна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 79 с. : 14 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ У ДЕТЕЙ:

СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Цитогенетические и молекулярные изменения при ОМЛ

1.2. Гены, кодирующие тирозинкиназные рецепторы. Этиология ОМЛ

1.2.1. Тирозинкиназный рецептор ГЬТЗ. Механизмы функционирования тирозинкиназ

1.2.2. Механизмы функционирования РЬТЗ. Мутации гена РЬТЗ обнаруживаемые при ОМЛ

1.2.3. Тирозинкиназный рецептор К1Т. Мутации гена К1Т обнаруживаемые при ОМЛ

1.3. Ген МЬЬ
1.3.1. Структура и функции гена МЫ
1.3.2. Мутации гена МЫ, выявляемые при ОМЛ
1.4. Г ен ЫРМ1
1.4.1. Функционирование нормального и онкогенного белка 1МРМ1
1.4.2. Структура гена ЫРМ1 и мутации, выявляемые при ОМЛ
1.5. Клиническ - лабораторные характеристики ОМЛ
1.6. Факторы прогноза при современной терапии ОМЛ
1.7. Терапия ОМЛ у детей
1.8. Эксперементальные методы лечения ОМЛ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика исследуемой группы больных с ОМЛ
2.1.1. Характеристика пациентов
2.1.2. Морфологические характеристики
2.1.3; Терапия исследуемой группы пациентов
2.1.4. Цитогенетические характеристики больных
2.1.5. Молекулярно-генетические характе]ристики больных
2.1.6. Диагностика ОМЛ
2.1.7. Диагностические критерии ОМЛ
2.2. Проведённые исследования
2.2.1.. Контрольная группа
2.2:2. Получение материала и его характеристика
2.2.3. Выделение ДНК
2.2.4. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.2.5. Очистка продуктов амплификации генов РЬТЗ, КІТ, ИРМЬ
2.2.6. Проведения реакции секвенирования
2.2.7. Электрофорез
2.2.8. Фрагментный анализ гена МЫ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЯ

ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ТЕРМИНОЛОГИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ
Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) представляет собой гетерогенную группу заболеваний, морфологическим субстратом которых являются миелоидные бластные клетки. К лейкозной трансформации при ОМЛ приводит накопление приобретенных соматических генетических изменений в кроветворных клетках-предшественниках.
Спектр молекулярных и генетических аберраций при ОМЛ очень широкий: это изменения числа и структуры хромосом, мутации генов, эпигенетические нарушения регуляции их активности. Клеточные процессы, которые подвергаются патологическим изменениям в результате этих молекулярных нарушений, включают регуляцию пролиферации, дифференцировки и выживания клеток, а таюке клеточные реакции, отвечающие за репарацию ДНК, стабильность и модулирование хроматина. Несмотря на широкую генетическую гетерогенность ОМЛ, современные модели лейкомогенеза предполагают, что в каждом конкретном ' случае развитие заболевания может быть вызвано двумя генетическими аберрациями. Была предложена «двухударная» теория патогенеза лейкозов [27]. По этой теории, гены, вовлеченные в патогенез, были условно разбиты на две группы. Одна группа (класс I) включает гены, мутации в которых вызывают активацию определенных путей сигнальной трансдукции, что приводит к повышенной пролиферации и/или выживанию лейкозных клеток-предшественников. К этой группе относятся мутации, ведущие к активации тирозинкиназных рецепторов FLT3 или KIT, а также мутации генов семейства RAS. Другая группа (класс II) включает мутации и/или хромосомные изменения,
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМОЙ ГРУППЫ БОЛЬНЫХ ОМЛ
2.1.1. Характеристика пациентов. В исследование были включены 124 ребёнка, в возрасте от 1 месяца до 18 лет (медиана 10,70 лет), поступивших в клиники-участницы исследования с 1999 года по 2009 год, мальчиков 79 (63,7%), девочек 45 (36,8%). Соотношение пациентов мужского и женского пола - 1,75:1. Шестьдесят девять детей были включены в исследование в РНПЦ ДОГ, Минск; 48 — в ФГУ ФНКЦ ДГОИ на базе РДКБ, Москва; 7 - в МДГКБ Москва.
2.1.2. Морфологические характеристики. В табл. 1 представлена частота различных вариантов ОМЛ в группе детей, включённых в исследование.
Таблица 1. Структура морфологических характеристик ОМЛ в исследуемой группе
Вариант ОМЛ Количество пациентов (п=124)
МО 2,4% (3)
М1 15,3% (19)
М2 33% (41)
М3 5,6% (7)
М4 16,1% (20)
М4Е0 1,6% (2)
М5 16,9% (21)
Мб 4,8% (6)
М7 2,4% (3)
МХ 1,6% (2)
Как видно из табл. 1, М2 вариант ОМЛ встречается у 33% больных, следующим по частоте идёт вариант М5 -16,9%, М4 - 16,1% больных, М1 - 15,3%, М3 - 5,6%, Мб -4,8%, М7 - 2,4%, МО - 2,4%, МХ - 1,6%, М4Е0 - 1,6% пациентов.
2.1.3. Терапия исследуемой группы пациентов. Терапия исследуемой группы пациентов представлена в табл. 2. Содержание протоколов представлено в приложениях 1-7.