Применение коллаген-хитозановых раневых покрытий и дермального эквивалента кожи в местном лечении термических ожогов

• Автор: Власов, Алексей Александрович
• Шифр специальности: 14.01.17
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 126 с. : 37 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. СОВРЕМЕНННЫЕ МЕТОДЫ МЕСТНОГО ЛЕЧЕНИЯ ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА КОЖИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Применение раневых покрытий в местном лечении ожогов
1.2. Возможность использования клеточных технологий в местном лечении
ожогов
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Получение и культивирование эмбриональных (фетальных) фибробластов крыс для прямой трансплантации
2.2. Технология получения дермального эквивалента кожи
2.3. Методы регистрации апоптоза клеток кожи крыс при контакте с коллаген-хитозановыми покрытиями
2.3.1. Детекция апоптоза эмбриональных фибробластов крыс с помощью микроскопической визуализации блеббинга
2.3.2. Детекция апоптоза эмбриональных фибробластов крыс с помощью системы Аппехт У-ИТС в суспензии клеток
2.4. Способ получения ожогов Ш-А и Ш-Б степеней в эксперименте
2.5. Этапы исследований коллаген-хитозановых раневых покрытий и дермального эквивалента кожи в местном лечении ожогов
2.6. Гистологический метод исследования ожоговых ран
2.7. Иммуногистохимический метод исследования ожоговых ран
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОЛЛАГЕН-ХИТОЗАНОВЫХ ПОКРЫТИЙ И ДЕРМАЛЬНОГО ЭКВИВАЛЕНТА КОЖИ
3.1. Результаты регистрации апоптоза клеток кожи при контакте с коллагенг хитозановыми покрытиями
3.2. Результаты применения дермального эквиалента кожи в местном
лечении термического ожога Ш-Б степени
3.3 Результаты применения коллаген-хитозановых покрытий в местном лечении ран
3.3.1. после нанесения ожога Ш-А степени
3.3.2. после нанесения ожога Ш-Б степени
ГЛАВА IV. РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ОЖОГОВОЙ ПОВЕРХНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОЛЛАГЕН-ХИТОЗАНОВЫХ ПОКРЫТИЙ В МЕСТНОМ ЛЕЧЕНИИ ТЕРМИЧЕСКОГО ОЖОГА
4.1. Результаты анализа маркёра пролиферативной активности клеток Кл
4.2. Результаты анализа маркера степени дифференцировки (зрелости) клеток макрофагального ряда СО
4.3. Результаты анализа маркера деструкции компонентов соединительнотканного матрикса ММР

4.4. Результаты анализа маркера деструкции компонентов соединительнотканного матрикса ММР
4.5. Результаты анализа маркера процессов продукции фиброзной ткани ТОБ-р,
4.6. Результаты анализа маркера внеклеточного матрикса, компонент
базальных мембран коллаген IV
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ
ИГХ - иммуногистохимический ИЛ - интерлейкин ДАБ - диаминобензидин
ДМЕМ - среда Игла в модификации Дульбекко ПЯЛ - полиморфно-ядерный лейкоцит ТУ - технические условия
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат кальция-натрия
ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка
BSC - двухслойный эквивалент кожи
FITC - флюорохром флюоресцеинизотиоционат
CD - кластер дифференцировки
Ki-67 - маркер пролиферации клеток
ММР - матриксная металлопротеиназа
PBS - фосфатный буфер
TGF - трансформирующийся фактор роста
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Основу собственного исследования составляет экспериментальный подход, заключающийся в изучении процессов репарации на модели ожоговой раны животных с помощью известных методов регистрации стадий заживления. Исследование осуществлялось в несколько этапов: получение фетальных фибробластов животных, их культивирование, трансплантация фибробластов на разработанное коллаген-хитозановое раневое покрытие «Коллахит-Бол», аппликация дермального эквивалента кожи, раневых покрытий «Коллахит-Бол» без клеточной массы, «Коллахит-Г» на раневую поверхность, наблюдение и анализ изучаемых параметров в соответствии с основными направлениями исследования.
2.1. ПОЛУЧЕНИЕ И.КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ (ФЕТАЛЬНЫХ) ФИБРОБЛАСТОВ КРЫС ДЛЯ ПРЯМОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ
Для получения эмбриональных фибробластов использовали фетусы крыс популяции Vistar (7-10-й. день беременности). Все манипуляции осуществлялись в соответствии с правилами гуманного обращения с лабораторными животными. Выделенные фетусы помещали в фосфатносолевой буфер Дульбекко, содержащий антибиотики
пенициллин+стрептомицин (100 мкг/мл), трижды отмывалн, затем переносили в среду ДМЕМ, где проводили отсечение кожных лоскутов. Далее материал переносили в раствор, содержащий трипсин и ЭДТА на фосфатно-солевом растворе, измельчали и культивировали 30 минут в термостате при +37°С. После инкубации пробы центрифугировали 5 минут при 1000 об/мин. Затем осадок переносили в среду ДМЕМ, содержащую 10% ЭТС (эмбриональной телячьей сыворотки), Ь-глутамин (1мМ), стрептомицин+пенициллин (100 мкг/мл), незаменимые аминокислоты (1мМ), смесь витаминов (1%), и пересаживали в культуральные матрасы (НуОопе). На следующий день оценивали адгезию материала и рост клеток. Смена среды осуществлялась каждые 3-5 суток в зависимости от интенсивности