Роль молекулярно-генетических методов Genotype в повышении эффективности диагностики туберкулеза с лекарственной устойчивостью микобактерий и микобактериозов

• Автор: Елисеев, Платон Иванович
• Шифр специальности: 14.01.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 83 с. : 14 ил.

Введение
Г лава 1. Обзор литературы
1.1. Методы диагностики туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью
1.2 Вопросы выявления М. tuberculosis с широкой лекарственной устойчивостью
1.3 Современные аспекты диагностики и лечения
микобактериозов
Глава 2. Материалы и методы исследования
Глава 3. Результаты исследования
3.1 Результаты определения множественной лекарственной
устойчивости МБТ методами Bactec MGTT 960 и Genotype MTBDRplus
3.2 Результаты определения ШЛУ методами абсолютных
концентраций на среде Левенштейна-Йенсена и Genotype MTBDRy
3.3 Диагностика и лечение микобактериозов
Глава 4. Обсуждение результатов исследования
4.1 Использование метода Genotype MTBDR/?/w.s для диагностики МЛУ ТБ в Архангельской области
4.2 Применение метода Genotype MTBDRs/ для диагностики ШЛУ ТБ
в Архангельской области
4.3 Использование метода Genotype Mycobacterium СМ для
диагностики микобактериозов в Архангельской области
Выводы
Практические рекомендации
Список сокращений
Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
В течение последних лет отмечается неуклонный рост числа ежегодно регистрируемых случаев туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ и ШЛУ ТБ) [92]. В Российской Федерации (РФ) доля МЛУ ТБ среди впервые выявленных больных составляет 14,4% [55]. В Архангельской области данный показатель превышает общероссийский и в течение последних лет составляет порядка 30% [54, 55, 56, 57, 92]. В то время как для лечения туберкулеза с сохраненной лекарственной чувствительностью применяются эффективные противотуберкулезные препараты (ПТП) «первого ряда», для лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью используются менее эффективные препараты резерва, которые имеют выраженные побочные действия, токсические эффекты и требуют больших экономических вложений [119]. Стратегия лечения больных туберкулезом с широкой лекарственной устойчивостью не разработана, и многие пациенты умирают от данной формы заболевания [119].
На этом фоне все более значимыми становятся вопросы, связанные с уменьшением сроков определения лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза, ранней госпитализацией больного в специализированное МЛУ/ШЛУ отделение и своевременным началом лечения [91]. В настоящее время, согласно основному регламентирующему документу, для регистрации случаев туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью в РФ используются методы определения лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза на среде Левенштейна-Иенсена [50]. Достоверность данных методов подтверждается системой внешнего контроля качества, однако на получение результатов в среднем необходимо два и более месяцев. В это время больной получает неэффективное лечение в неспециализированном отделении, что может привести к дополнительной амплификации лекарственной устойчивости или нозокомиальному инфицированию [10].
Также в мире все более актуальными становятся вопросы, связанные с диагностикой и лечением заболеваний, вызываемых микобактериями, не относящимися к туберкулезному комплексу, так называемых «микобактериозов» [14]. Зачастую трудности диагностики микобактериозов обусловлены их клиническим сходством с туберкулезом [14], а классические бактериологические тесты определения вида микобактерий занимают много времени и не обладают достаточной специфичностью [30]. При этом сходство клиникорентгенологических проявлений и обнаружение в мокроте кислотоустойчивых микобактерий часто приводит к неправильной постановке диагноза и госпитализации больных в противотуберкулезное отделение [14]. Несмотря на то, что для лечения микобактериозов могут применяться противотуберкулезные препараты, выбор их ограничен ввиду устойчивости к ним микобактерий [14]. Таким образом, результатом несвоевременной диагностики микобактериозов может стать назначение неадекватной схемы лечения, госпитализация пациента в противотуберкулезное отделение, что может привести к ухудшению результатов лечения, а также нозокомиальному инфицированию М. tuberculosis.
Молекулярно-генетические методы, в основе которых лежит полимеразная цепная реакция, позволяют значительно сократить время диагностики туберкулеза, определения лекарственной чувствительности [76] и вида микобактерии [116, 124]. В настоящее время с этой целыо используются различные молекулярно-генетические методы для диагностики туберкулеза и микобактериозов.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) на основе данных, полученных в результате мета-анализа [105], рекомендовала национальным противотуберкулезным программам метод Genotype (Hain Lifescience) для диагностики МЛУ ТБ. Также данным производителем разработаны аналогичные методы для диагностики лекарственной устойчивости к препаратам второго ряда и выявления микобактериозов. Тем не менее, остается неизученным вопрос применения данных методов в ежедневной практике противотуберкулезной

11 1*0 I
Рисунок 10. Пример результата Genotype Mycobacterium СМ при обнаружении М
Intracellulare
0 0
1 i 1 ' "1 I
Рисунок 11. Пример результата Genotype Mycobacterium СМ при обнаружении М
gordonae

ill 1 » 1*1
Рисунок 12. Пример результата Genotype Mycobacterium СМ при обнаружении М
fortuitum

1 > i I
Рисунок 13. Пример результата Genotype Mycobacterium CM при обнаружении М. chelonae
Выполнение посева, а также постановка теста лекарственной чувствительности (ТЛЧ) в системе Bactec MGIT проводились в соответствии с рекомендациями производителя [52]. Культивирование микроорганизмов производится в специальных пробирках с жидкой питательной средой на основе модифицированной среды Middlebrook 7Н9. Предпосевная обработка нативного материала осуществляется с помощью BBL MycoPrep NALC_NaOH с конечной