Иммунодиагностика и иммунотерапия туберкулезной инфекции у детей и подростков.

• Автор: Мордовская, Лариса Ивановна
• Шифр специальности: 14.01.16
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 198 с. : 23 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Эпидемиология туберкулеза у детей ^подростков

1.2. Туберкулиновая диагностика туберкулезной инфекции-у детей и* подростков»

1.3. Возрастные особенности туберкулезного инфицирования у детей

1.4. Механизмы иммунологической резистентности к туберкулезной инфекции

1.4.1. Субпопуляция гамма-дельта у5 Т-лимфоцитов

1.5. Методы иммунологической диагностики туберкулезной инфекции

1.6. Лечение туберкулеза и иммунный ответ
1.6.1.Интерферон-гамма как фактор иммунологической резистентности к
туберкулезной инфекции 42'
1.7. Иммунотерапия-туберкулезной инфекции 45 ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Характеристика клинического материала
2.2. Описание методов исследования
2.2.1. Антиген-специфическая индукция иммунного ответа ex vivo
2.2.2. Фенотипические методы исследования Т-лимфоцитов
2.3. Методика использования иммунотерапевтического препарата «Аффи-нолейкин» в комплексном лечении туберкулеза легких у подростков
ГЛАВА 3. Разработка методов иммунодиагностики и контроля иммунного ответа при туберкулезной инфекции у детей и подростков на основе антиген-индуцированной продукции провоспалительных цитокинов интерферона-гамма (ИФН-у) и фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-а)
3.1. Разработка-метода иммуноферментного анализа (ИФА) для количественного определения интерферона-гамма (ИФН-у)
3.2. Разработка тест-системы для определения антиген индуцированного фактора-некроза опухоли-альфа (ФНО-а).
ГЛАВА 4. Эффективность применения тест-системы «Тубинферон» -индукция IFN-y в образцах цельной крови ex vivo специфическим
рекомбинантным антигеном ESAT-6
ГЛАВА 5. Изучение специфического клеточного иммунного ответа в> образцах цельной крови ex vivo у больных туберкулезом легких в процессе противотуберкулезной химиотерапии
5.1. Антиген-индуцированная продукция ИФН-у в образцах цельной крови в присутствии туберкулина PPD и специфического антигена ESAT-6
5.2. Иммунофенотипирование Т-клеточных субпопуляций при индукции иммунного ответа к специфическим антигенам МВТ в образцах цельной крови ex vivo
5.3. Факторы клеточного иммунного ответа в оценке активности
туберкулезной инфекции
5.3.1. Антиген-индуцированная продукция фактора некроза опухоли-альфа
(ФНО-а) в образцах цельной крови exvivo
5.3.2.Антиген-индуцированная продукция перфорина в популяции
цитотоксических (CD8) Т-лимфоцитов
ГЛАВА 6. Применение и иммунологический анализ эффективности иммунотерапевтического препарата «Аффинолейкин» при туберкулезе легких
Заключение Ю
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы 1 ^
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
aji — популяция альфа-бета Т-лимфоцитов
Антиген ESAT-6 — секретируемый пептид с молекулярной массой 6 кДа продукт метаболической активности М. tuberculosis
Антиген CFP-10 - белок культурального фильтрата с молекулярной массой ЮкДа
АФЛ - аффинолейкин
БЦЖ - бацилла Кальметта - Жерена
уб - популяция гамма-дельта Т-лимфоцитов
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ГКП - градуированная кожная проба Гринчара-Карпиловского
ДИ - доверительный интервал для 95% уровня достоверности
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
ИФН-у - интерферон-гамма
ИЛ - интерлейкин
ИФА — иммуноферментный анализ
QFT- QuantiFERON TB-Gold
КТ - компьютерная томография
МВТ - микобактерии туберкулеза
МВТ (-) - больной туберкулезом без бактериовыделения МВТ (+) - больной туберкулезом с бактериовыделением
МЛУ МВТ - множественная лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза
МКАТ - моноклональные антитела
МНС - молекулы главного комплекса гистосовместимости
ОП - оптическая плотность
ПВА - поствакцинальная аллергия
ПМ с 2ТЕ - проба Манту с ТЕ ППД-Л
PPD - сухой очищенный туберкулин

исследований обусловлено! получением микобактериальных антигенных мишеней, которые обеспечивали? бы высокую, не менее чем 97-98% специфичность анализа: При этом* предполагается; что чувствительность анализа должна быть, на уровне около-80%. До настоящего, времени, несмотря» на использование огромного спектра- антигенных препаратов; включая различные генно-инженерные продукты, уровень специфичности иммуноферментной серодиагностики не превышает 95% (Литвинов В.И., Апт A.C., Еремеев В:В., 2007)., Наиболее эффективным оказалось определение противотуберкулезных антител при анализе спинно-мозговой жидкости. Поиску специфических антигенов в биологических жидкостях также придается большое значение. Ряд исследователей показали обнаружение антигенов МВТ в сыворотке крови; клинических образцах мокроты или бронхоальвеолярном смыве (Attallah А.М:, Osman S., Saad A. et al., 2005; Туровцева Ю.В., 2000; El-Mastry S. et al., 2008), с помощью иммуноферментного дот-анализа с использованием моноклональных антител к микобактериальному антигену с молекулярной массой 20 кд показали возможность определения этого антигена в сыворотке 90,8% больных туберкулезом легких с подтвержденным, выделением МВТ при 89,6% специфичности. Тем не менее эти. данные не получили надежного подтверждения. Значительный интерес представляет недавнее сообщение группы исследователей из США об обнаружении специфических антигенов МВТ в моче (Kashino S.S., Pollock N., Napolitano D:R. et al., 2008), однако в этом сообщении использовался сложный метод масс-спектрометрического анализа.
В последнее десятилетие наибольшее внимание исследователей уделено клеточной иммунологической реакции в образцах цельной крови ex vivo -антиген-индуцированной продукции интерферона-гамма.
Интерферон-гамма (ИФН-у) является одним из важнейших цитокинов -медиаторных факторов активации макрофагов туберкулезного воспаления (Flynn J.L. et al., 1993). CD4+ Т-лимфоциты после взаимодействия с антигенами МВТ продуцируют гамма-интерферон, который может быть обнаружен в