Значение взаимодействия между рецепторами эстрогенов и белком Snail1 в развитии гормональной резистентности рака молочной железы

• Автор: Андреева, Ольга Евгеньевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гормональная резистентность РМЖ. Причины и следствия

1Л .1. Роль эстрогенов в опухолевой прогрессии

1Л.2. Современные представления о механизме действия эстрогенов на

клетки-мишени. Рецепторы эстрогенеов

1.1.3. Геномный и негеномный эффекты эстрогенов

1.1.4. Основные механизмы утраты гормональной зависимости

1.1.5. Нарушение экспрессии РЭ и мутации в функциональных

активационных доменах РЭ

1.1.6. Нарушение баланса между белками-активаторами и белками-
супрессорами РЭ и их взаимодействия с РЭ
1.1.7. Селективные модуляторы рецепторов эстрогенов
1.1.8. Причины развития гормональной резистентности РМЖ
1.2. Эпителиально-мезенхимальный переход: общие представления; его значение при развитии РМЖ
1.2.1. ЭМП в эволюции и развитии
1.2.2. Частичный ЭМП в онтогенезе и патогенезе
1.2.3. Первый этап ЭМП: подавление Е-кадхерина
1.2.4. Белки суперсемейства Snail и негативная регуляция Е-кадхерина
1.2.5. Snaill: трансрепрессорная функция
1.2.6. Snaill: транс-активаторная функция

1.2.7. Регуляция активности и стабильности Snaill
1.2.8. Регуляция Slug и Smuc
1.2.9. Регуляция экспрессии Snaill
1.2.10. Подавление Е-кадхерина - причина активации Snaill
1.2.11. Регуляция экспрессии и стабильности Snaill при ЭМП
1.2.12. ЭМП в эпителиальных опухолях
1.2.13. Выживаемость неопластических клеток и ЭМП
1.3. Роль Snaill в прогрессии РМЖ
1.3.1. ЭМП в развитии молочной железы
1.3.2. Участие ЭМП в прогрессии некоторых типов РМЖ
1.3.3. Взаимная регуляция РЭ и Snaill. Snaill подавляет РЭ
1.3.4. РЭ подавляет Snaill
1.3.5. Роль РЭ в регуляции транскрипции Е-кадхерина
1.3.6. Возможные сценарии ЭМП в гормон-резистентных клетках
1.4. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клеточные культуры. Получение сублинии MCF-7/LS
I , (
2.2. Транзиторная трансфекция экспрессионных и репортерных векторных конструкций. Определение активности репортерных генов
2.3. Гибридизация и трансфекция коротких интерферирующих РНК
2.4. Получение клеточных экстрактов и SDS-электрофорез в полиакриламидном геле
2.5. Иммуноблоттинг
2.6. Определение скорости роста клеток. МТТ-тест
2.7. Определение уровня апоптоза
2.8. Статистическая обработка результатов
2.9. Список использованных реактивов. Оборудование и приборы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Экспрессия и активность Snaill в клетках эстрогензависимых и резистентных линий РМЖ
3.1.1.Экспрессия Snaill в клетках эстрогензависимых и резистентных линий РМЖ
3.1.2. Трансрепрессорная активность Snaill в клетках MCF-7, MCF-7/LS и HBL-
3.1.3. Сравнительный анализ экспрессии Е- и N-кадхерина в клетках MCF-7, MCF-7/LS и HBL100
3.1.4. Анализ трансрепрессорной активности Snaill в линиях ВТ-474 и MDA-МВ-
3.2. Исследование влияния Snaill на активность аппарата рецептора эстрогенов. Роль Snaill в регуляции роста и выживаемости клеток эстрогеннезависимых опухолей молочной железы
3.2.1. Роль Snaill в регуляции РЭ. Содержание и транскрипционная активность РЭ при гиперэспрессии Snaill
3.2.2. Содержание и транскрипционная активность РЭ при подавлении Snaill
3.2.3. Влияние Snaill на чувствительность клеток РМЖ к тамоксифену
3.2.4. Влияние Snaill на чувствительность клеток к доксорубицину
3.3. Пути регуляции Snaill при развитии гормональной резистентности
контактов при поступлении стимулов от тирозинкиназных рецепторов с

участием транскрипционного фактора FoxCl, онкогена Ras или белка адгезии L1 [60, 61].
Экспрессия гена Е-кадхерина (CDH-1) контролируется рядом транскрипционных репрессоров, активация которых характерна для мезенхимальных клеток. Эти транскрипционные факторы связываются со специфической последовательностью в промоторе CDH-1, Е-боксом (Е-Ьох, 5’-CACCTG-3’).
В клеточных линиях со сниженной экспрессией Е-кадхерина при возникновении мутаций в Е-боксе влияние транскрипционных репрессоров нивелируется [56, 57].
1. 2. 4. Белки суперсемейства Snail и негативная регуляция Е-кадхерина
В 2000 году в двух независимых работах было продемонстрировано, что в подавлении Е-кадхерина участвует транскрипционный фактор Snaill [62-64]. С тех пор было описано большое количество других транскрипционных репрессоров Е-кадхерина, хотя лишь 6 из них взаимодействуют с промотором CDH-1 непосредственно. ,
Помимо KLF-8, действующего через GT-боксы [65], остальные 5 транскрипционных репрессоров связываются с Е-боксами; к ним относятся:
- 2 представителя семейства Snail (Snail/Snail 1, Slug/Snail2) [62, 63, 65];
- белки из семейства Zeb (Zebl, 2),
- а также Е47 из семейства bHLH [64].
Представителей транскрипционных факторов семейства bHLH
объединяет наличие консервативного структурного домена,
представляющего собой 2 параллельные альфа-спирали, соединенные