Реконструкция костной ткани с использованием скелета натуральных кораллов Acropora cervicornis у больных с доброкачественными образованиями костей (экспериментально-клиническое исследование)

• Автор: Мыслевцев, Игорь Валерьевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : 33 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Опухоли костей

1.2 Требования к биоматериалам для восстановления костной ткани

1.2.1 Аутотрансплататы

1.2.2 Аллотрансплататы

1.2.3 Ксенотрансплантаты

1.2.4 Имплататы на основе керамики

1.2.5 Полимеры

1.2.6 Металлы
1.3 Опыт использования натуральных кораллов
1.4 Резюме
ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Общая характеристика работы
2.2 Доклинические исследования натурального коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vitro и in vivo
2.2.1 Подготовка и стерилизация натуральных кораллов
2.2.2 Исследования in vitro острой цитотоксичности и матриксных свойств поверхности образцов НК
2.2.3 Исследование остеоиндуцирующих свойств скелета НК как матрикса для культур ММСК
2.2.4 Оценка биосовместимости образцов коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vivo
2.2.5 Исследование остеозамещающих потенций образцов коралла семейства Acroporidae на модели дефекта большеберцовой кости крысы в экспериментах in vivo
2.2.6 Исследование остеозамещающих потенций НК на модели критического дефекта бедренной кости барана
2.3 Клинический этап исследования
ГЛАВА III. ЭКСПЕИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НК
3.1 Физико-химическая характеристика образцов натуральных кораллов, включенных в исследование
3.2 Исследование цитотоксичности, адгезивных для клеток свойств, способности поддерживать пролиферацию клеток
3.2.1 Исследование спонтанной дифференцировки
3.3. Исследования биосовместимости и остеозамещающих свойств скелета НК семейства Acroporidae in vivo у лабораторных животных
3.3.1 Изучение биосовместимости скелета РЖ
3.3.2 Исследование способности НК в гранулированном виде замещать окончатые дефекты у мелких лабораторных животных
3.3.3 Исследование способности НК в виде цельного имплантата замещать дефекты больше критического у крупных лабораторных животных.
3.4 Резюме
ГЛАВА IV. КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НК
4.1 Основная группа
4.2 Группа сравнения
4.3 Резюме
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 - экспертное заключения о токсичности НК, ФГУ «Всероссийский Научно-Исследовательский и Испытательный Институт Медицинской Техники».
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
/3-ТКФ /3-трикальцийфосфат
ГА гидроксиапатит
жт жировая ткань
КТ компьютерная томография
ЩФ щелочная фосфотаза
ммск мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки
МРТ магнитно-резонансная томография
НК натуральные кораллы
нпвс нестероидные противовоспалительные средства
пжк пул жизнеспособных клеток
ГІРС полная ростовая среда
ПЦР полимеразная цепная реакция
РИД радиоизотопная диагностика
СЭМ сканирующая электронная микроскопия
ФЧ фибробласты человека.
ЭОП электронно-оптический преобразователь.
Эхо-КГ эхокардиография.

промывали в течение 3-4 часов в холодной проточной воде. На заключительном этапе частицы НК замачивали на 8 часов при комнатной температуре в дистиллированной воде в соотношении НК/Н20 (по объему) 1:10, заменяя дистиллированную воду каждые 2 часа на свежую порцию, затем высушивали их в сухожаровом шкафу при температуре 50-60°С в течение 8 часов и раскладывали по стеклянным флаконам объемом 10 см3.
Далее проводили стерилизацию частиц НК 7-облучением в дозе 20-25 кГр на установке РХМ- 7 -20. На заключительном этапе осуществляли бактериологический контроль стерильности НК (15% образцов из каждой партии, анализатор бактериологический «BioTrack 4250», SY-LAB GmbH, Австрия; анализатор бактериологический «Bactec 9120», Becton Dickinson, США), в соответствии с требованиями.
2.2.2 Исследования in vitro острой цитотоксичности и матриксных свойств
поверхности образцов НК
За сутки перед началом опыта стерильные коралловые частицы размером 0,2-0,6 мм помещали в 24-х луночные культуральные планшеты (Costar, США) и заливали полной ростовой средой (ПРС) следующего состава: среда ДМЕМ (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова, РАМН, Москва), 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ПанЭко, Москва), глютамин (бООмг/л). Каждый образец НК в платах был представлен в триплетах.
Оценку острой цитотоксичность НК и динамики нарастания на них клеток выполнены на клеточной линии иммортализованных нормальных фибробластов человека (ФЧ, клон №1608), полученной из Медико-Генетического научного центра РАМН, г. Москва. Клеточную линию поддерживали в ПРС на основе среды ДМЕМ (см. выше).
В экспериментах использовали клетки в логарифмической фазе роста (предконфлюэнтный монослой). Для получения суспензии одиночных клеток монослой ФЧ обрабатывали 0,25% раствором трипсина (Sigma,США), затем