Межклеточные взаимодействия и локомоторная активность трансформированных эпителиоцитов

• Автор: Житняк, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цель и задачи работы

Научная новизна и практическая значимость работы

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава Е Морфологическая трансформация эпителиальных клеток, феномен

эпителиально-мезенхимального перехода

1.1. Ослабление межклеточной адгезии при неопластической трансформации

1.1.1. Межклеточные адгезионные контакты, связь с актиновым цитоскелетом
1.1.2. Угнетение экспрессии гена Е-кадхерина (CDII1) при неопластической 16 трансформации
1.1.2.1. Мутации гена Е-кадхерина
1.1.2.2. Эпигенетические механизмы угнетения экспрессии Е-кадхерина
1.1.2.3. Транскрипционная репрессия гена Е-кадхерина в опухолевых клетках
1.1.3. Wnt - сигнальный путь
1.1.4. Изменения регуляции эндоцитоза Е-кадхерина при неопластической 23 трансформации
1.2. Приобретение мезенхимального фенотипа
1.2.1. Экспрессия мезенхимальных маркеров
1.2.2. Влияние экспрессии N-кадхерина на поведение трансформированных 25 эпителиоцитов
1.2.3. Изменения клеточной подвижности в результате трансформации
1.2.3.1. Миграция одиночных клеток
1.2.3.2. Коллективная миграция
1.3. Секреция металлопротенназ 3
1.4. Потеря клеточной полярности и разрушение плотных контактов
Глава 2. Протоонкогены семейства RAS, их роль в канцерогенезе
2.1. Мутации Ras и их роль в канцерогенезе
2.2. Эффекторы Ras, активация внутриклеточных сигнальных путей
2.2.1. Взаимодействие Ras с Raf и МАР-киназный каскад
2.2.2. PI3K сигнальный путь и его активация белком Ras
2.2.3. Активация белков Ral
2.2.4. Другие эффекторы Ras
2.3. Морфологическая Ras-трансформация
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Антитела, красители и ингибиторы
2. Клеточные культуры
3. Культивирование клеток
4. Клонирование клеток
5. Плазмиды и методы трансфекции
6. Фиксация клеток
7. Иммунофлуоресцентное окрашивание и микроскопия
8. Морфометрия
9. Видеомикроскопия и анализ изображений
10. Миграционная активность
11. Иммуноблоттинг
12. Анализ туморогенности
РЕЗУЛЬТАТЫ
Глава 1. Морфологическая трансформация эпителиальных клеток 1.1 .Изменения морфологии эпителиальных клеток IAR в результате трансформации
1 ^.Реорганизация актинового цитоскелета при трансформации эпителиоцитов IAR онкогеном RAS или химическими канцерогенами
1.3.Изменения организации межклеточных адгезионных контактов при трансформации эпителиальных клеток IAR
1.4.Изменения организации плотных контактов трансформированных эпителиальных клеток IAR
1.5.Влияние экзогенной экспрессии гена Е-кадхерина на фенотип трансформированных эпителиальных клеток IAR

Глава 2. Динамика межклеточных взаимодействий в системе узкой раны
2.1. Феномен контактного паралича нетрансформированных эпителиоцитов 1АЯ-
2.2. Отсутствие контактного паралича у трансформированных эпителиальных клеток 1АЫ
2.3. Влияние ингибитора сократимости У-27632 на развитие контактного паралича нетрансформированных эпителиоцитов ТАИ-
Глава 3. Изменение подвижности эпителиальных клеток в результате трансформации
3.1. Поведение нетрансформированных и трансформированных эпителиальных клеток 1АИ в системе широкой раны
3.2. Поведение нетрансформированных и грансформированных эпителиальных клеток 1АЯ в редкой культуре
3.3. Анализ параметров подвижности нетрансформированных и трансформированных эпителиальных клеток 1АЯ
Глава 4. Миграционная активность нетрансформированных и
грансформированных эпителиальных клеток 1АЯ
Глава 5. Туморогенность Яаз-трансформированных эпителиальных клеток

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

кадхерина. В клетках линии DLD1 рака толстой кишки человека экспрессия hNanosl индуцировала перемещение р120-катенина в цитоплазму, активировала экспрессию МТ1-ММР, как на уровне мРНК, так и на уровне белка, и увеличила миграционные и инвазивные характеристики клеток (Strumane et al., 2006; Bonnomet et al., 2008).
В трансформированных инвазирующих клетках могут происходить нарушения процесса эндоцитоза МТ1-ММР, что в конечном счете приводит к стабилизации MMPs на поверхности клетки и усилению увеличению степени деградации окружающего клетку матрикса (Li et al., 2008; Remacle et al., 2005).
1.4. Потеря клеточной полярности и разрушение плотных контактов
В эпителиальных клетках существует взаимосвязь между формированием межклеточных контактов и установлением апикально-базолатеральной полярности (Niessen and Gottardi, 2009). Базолатеральные белки принимают поляризационные сигналы от инициальных межклеточных контактов. Фактически, АК вместе с плотными контактами служат структурными ориентирами для осуществления клеточной поляризации посредством передачи поляризационных сигналов через мульти-белковые сигнальные комплексы, ключевые для формирования апикального домена (РагЗ/Рагб/аРКС, Crumbs и Scribble) (Shin et al., 2006), и установления сайтов везикулярного транспорта (Бесб/в-комплекс) (Yeaman et al., 2004). РагЗ может взаимодействовать с С-концевым участком ß-катенина, нектинами 1 и 3, а также белком Echinoid (Wei et al., 2005), что обеспечивает множество вариантов связывания и привлечения белка РагЗ в область АК. Локальное повышение концентрации РагЗ обеспечивает привлечение поляризационных комплексов в зону АК.
Плотные контакты наряду с АК играют важную роль в осуществлении структурной и функциональной целостности эпителиальных пластов (см. обзор Hartsock and Nelson, 2008; Martin and Jiang, 2009). Белки, участвующие в построении плотных контактов можно разделить на три группы (Martin and Jiang, 2009): 1) интегральные трансмембранные белки -окклюдин, клаудины 1-24, JAMs А-С, 4 (Junctional adhesion molecules) и другие белки, принадлежащие семейству СТХ, такие как CAR (Coxsackie adenovirus receptor); 2) периферические заякоривающие белки, часто содержащие PDZ-последователыюсти — ZO-1 (Zonula occludens), -2, -3, MAGI-1, -2, -3, MUPP-1, Par-3/ASIP, Par-6, AF-6/афадин, CASK, CAROM; 3) белки, ассоциированные с плотными контактами или регуляторные белки -зингулин, 7Н6, симплекин, ZONAB, Rab-13, 19В1, понзин, Rab-ЗВ, РКС, c-src, Gai-2, Gai-12, a-катешш, Pals, PATJ, РКА, JEAP, Pilt, PTEN, ZAK, SCRIB, ITCH, ГТФазы Rho, WNK4, винкулин. Интегральные трансмембранные белки отвечают за сборку и контролируют