Влияние цитомегаловирусной инфекции на клиническое течение рака предстательной железы

• Автор: Андабеков, Тимур Турдеевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 81 с. : 17 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ПАТОГЕНЕЗА

ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Характеристика цитомегаловируса
1.2. Экспериментальные исследования влияния цитомегаловирусной инфекции на канцерогенез
1.2.1 Влияние цитомегаловируса на клеточный цикл
1.2.2. Влияние цитомегаловируса на иммунную систему
1.2.3. Влияние цитомегаловируса на устойчивость опухолевых клеток к цитотоксическим химиопрепаратам
1.2.4. Влияние цитомегаловируса на неоангиогенез
1.2.5. Влияние цитомегаловируса на метастазирование опухолевых клеток
1.3. Экспериментальные исследования влияния цитомегаловируса на опухолевые клетки рака предстательной железы

1.4. Применение молекулярно- биологических методов в диагностики цитомегаловирусной инфекции
1.4.1. Получение ДНК цитомегаловируса из архивного патологоанатомического материала
1.4.2. Использование полимеразной цепной реакции для диагностики цитомегаловирусной инфекции
ГЛАВА 2. ПРИНЦИПЫ ГРУППИРОВКИ БОЛЬНЫХ. РАЗРАБОТКА
МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ДНК ЭКСТРАКЦИИ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
2.1. Распределение больных по клинически значимым критериям прогноза
2.2. Разработка метода выделения ДНК
2.3. Методика проведения полимеразной цепной реакции с праймерами к областям М1Е и СМУро1 цитомегаловируса
2.3. Статистический анализ
ГЛАВА 3. ВЗАИМОСВЯЗЬ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
И КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
3.1. Инфицированность ткани предстательной железы цитомегаловирусом у больных РПЖ
3.2. Показатель уровня дифференцировки опухоли в исследуемых группах пациентов
3.3. Продолжительность жизни и безрецидивный период у анализируемых пациентов
3.4. Характер метастазирования РПЖ у больных в зависимости от наличия ЦМВИ
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ РАЗРАБОТАННОГО
МЕТОДА ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ АРХИВНОГО МАТЕРИАЛА

4.1. Результаты отработки метода выделения ДНК из архивного гистологического материала
4.2. Возможности применения разработанного метода выделения ДНК...69 ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РОЛИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ
ИНФЕКЦИИ ПРИ РАКЕ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
5.1. Анализ инфицированности ЦМВ ткани предстательной железы у больных РПЖ
5.2 Зависимость между ЦМВИ простаты и степенью дифференцировки опухоли у больных РПЖ
5.3 Взаимосвязь между ЦМВИ простаты и показателями эффективности
лечения больных РПЖ
5.4. Взаимосвязь между ЦМВИ простаты и особенностями метастазирования РПЖ у исследуемых пациентов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

(фиксация-в формалине, закрепление в парафине), что в конечной стадии приводит к разрывам в молекуле ДНК. Такая ДНК мало пригодна для полноценного использования в полимеразной цепной реакции (ПЦР), в связи с малыми фрагментами. Дополнительный вклад в повреждение ДНК вносит и тип забора тканей. То есть получения исследуемых образцов при помощи вапоризатора (ТУР предстательной железы) сопровождается термическим повреждением клеток, при этом после РПЭ позволяет сохранить ДНК.
Для устранения данной проблемы предложено множество различных методик выделения ДНК из архивных тканей от простейших (двухэтапные) до сложных (многоэтапные). Также используются фирменные наборы-для выделения ДНК, но обладая одинаковыми характеристиками с другим значительно дороже. Все они (методы экстракции из парафиновых блоков) основаны на двух последовательных стадиях- это депарафинизация- и очистка. Первый этап (депарафинизация) производится путем нагревания и удаления парафина или его растворением специальными реагентами. Эта стадия нужна для избавления от парафина, чтобы перейти к следующему этапу и создать благоприятные условия для работы ферментов. На втором этапе производится- очистка ДНК от белков, жиров, углеводов и неорганических примесей:
В работе Goombs N. J. и соавторов (1999) проанализированы по основные и доступные методики выделения ДНК из парафиновых блоков для дальнейшего использования в реакции ПЦР. Проанализировано девять способов, причем сравнивались общепринятые методики и фирменные наборы для выделения-. В:итоге наилучшие результаты (ДНК пригодной для ПЦР) получены методикой, которой удалось выделить качественную ДНК в 61,3%, при этом фирменным набором 60%. Этот способ ( с показателем 61,3%) экстракции из формалинфиксированной биологической ткани включает получение среза из парафинового блока с гистологическим материалом толщиной 20 мкм, добавление к нему 100 мкл 0,5 % водного раствора Tween 20, нагревание полученной смеси при 90°С с последующим