Иммунолипосомальные конструкции доксорубицина и модели для их доклинического исследования

• Автор: Соколова, Дарина Вадимовна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Лиганд-опосредованный транспорт противоопухолевых

препаратов

1.1.1. Иммунолипосомы - системы адресной доставки препаратов в опухоль

1.1.2. Строение иммунолипосом

1.2. Моноклональные антитела - специфический вектор для

адресной доставки

1.2.1. Стратегии снижения иммуногенности иммунолипосом
1.2.2. Локализация моноклональных антител на поверхности иммунолипосом. Типы иммунолипосом
1.2.3. Методы конъюгации моноклональных антител к поверхности иммунолипосом
1.3. Оптимизация дизайна липосом для эффективной направленной доставки in vivo
1.3.1. Размер иммунолипосом
1.3.2. Стерическая стабилизация иммунолипосом
1.4. Антрациклиновые антибиотики. Доксорубицина гидрохлорид
1.5. Модели для исследования антипролиферативной активности адресных препаратов
1.5.1. Характеристики адекватной опухолевой модели
1.5.2. Этапы разработки модели опухоли человека
1.6. Характеристики опухолевой модели и мишеней,
определяющие адресность доставки лекарственного средства
1.6.1. Кинетика роста опухоли
1.6.2. Связь антигенного статуса опухоли с эффективностью направленной доставки
1.7. MUC-1 антиген как мишень для адресной доставки
противоопухолевых препаратов
1.8. HLA-DR антиген как потенциальная мишень для таргетной терапии
Заключение
ГЛАВА. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и реактивы
2.2. Оборудование
2.3. Клеточные линии опухолей человека
2.4. Опухолевый штамм
2.5. Лабораторные животные
2.6. Методы исследований
2.6.1. Технологические методы получения конструкции
иммунолипосомального доксорубицина
2.6.2. Химико-фармацевтические и физические методы анализа полученных дисперсий
2.7. Исследование специфической активности
иммунолипосомальных конструкций доксорубицина in vitro
2.7.1. Оценка специфического связывания иммунолипосомальных конструкций с клетками-мишенями методом непрямой реакции поверхностной иммунофлуоресценции (РИФ)
2.7.2. Оценка цитотоксической активности
иммунолипосомальных конструкций доксорубицина МТТ-тестом
2.8. Технологические методы получения и исследования опухолевых моделей in vivo
2.8.1. Гетеротрансплантация опухолевых клеток
2.8.2. Дезагрегация образцов опухоли
2.8.3. Мониторинг кинетики роста подкожных ксенографтов
на мышах Balb/c nude
2.8.4. Морфолологическое исследование подкожных ксенографтов
2.8.5. Иммунофенотипическое исследование подкожных ксенографтов
2.8.6. Иммуногистохимическое исследование подкожных ксенографтов..
2.9. Статистическая обработка данных
2.10. Завершение экспериментов с животными
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ
СТЕРИЧЕСКИ СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНЫХ КОНСТРУКЦИЙ ДОКСОРУБИЦИНА
3.1. Технология получения иммунолипосомальных
конструкций доксорубицина............'........................... 62..
3.1.1. Получение болыиих.стерически стабилизированных липосом
3.1.2. Получение малых однослойных стерически
стабилизированных липосом
3.1.3. Получение иммунолипосомальных конструкций доксорубицина
3.1.4. Измерение размера иммунолипосомальных конструкций
3.1.5. Получение чистой фракции иммунолипосомальных
конструкций доксорубицина
3.1.6. Спектрофотометрическое определение содержания доксорубицина в иммунолипосомальных конструкциях
3.1.7. Определение количества,моноклональных антител,
связанных с поверхностью липосом .............................. 73 :
3.2. Исследование специфической активности иммунолипосомальных конструкций доксорубицина in vitro

3.2.1. Оценка специфического связывания иммунолипосом с клетками-мишенями
3.2.2. Оценка цитотоксической активности иммунолипосомальных
конструкций доксорубицина
Заключение
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МОДЕЛЕЙ ДЛЯ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНЫХ КОНСТРУКЦИЙ ПРОТИВ HLA-DR И MUC-1 ПОЗИТИВНЫХ КЛЕТОК
4.1. Основные биологические характеристики штамма ЛБР-
как модели для изучения ант-HLA-DR препаратов
4.1.1. Мониторинг кинетики роста подкожных ксенографтов ЛБР-
на мышах Balb/c nude
4.1.2. Гистологическая характеристика подкожных ксенографтов ЛБР-2
4.1.3. Иммунофенотипическая характеристика подкожных ксенографтов ЛБР-
4.1.4. Определение ангиогенной активности подкожных ксенографтов

4.2. Получение моделей для доклинического
изучения иммунолипосомальных конструкций, направленных против MUC-1 антигена
4.2.1. Мониторинг кинетики роста подкожных ксенографтов SKOV
in vivo
4.2.2. Гистологическая характеристика подкожных ксенографтов
SKOV3 у мышей-самок Balb/c nude
4.2.3. Иммунофенотипическая характеристика подкожных ксенографтов SKOV3 у мышей-самок Balb/c nude
4.2.4. Определение ангиогенной активности подкожных
ксенографтов SKOV
4.2.5. Мониторинг кинетики роста подкожных ксенографтов T-47D
in vivo
4.2.6. Гистологическая характеристика подкожных ксенографтов
T-47D у мышей-самок Balb/c nude
4.2.7. Иммунофенотипическая характеристика подкожных ксенографтов T-47D
4.2.8. Определение ангиогенной активности подкожных ксенографтов
T-47D
Заключение
ВЫВОДЫ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ

вого материала. Иммунодефицитные мыши стали также хорошей моделью иммунодефицита для фундаментальной иммунологии. Процесс создания различных видов иммунодефицита у мышей продолжается.
Материал для получения перевиваемого опухолевого штамма
Материалом для получения опухолевых штаммов человека на бести-мусных мышах могут служить первичные опухоли или метастазы (операционный материал или биоптат), а также клеточные линии опухолей человека. В целом, полученные из биоптатов ксенографты лучше сохраняют свойства исходной опухоли человека [128, 138, 139, 153]. Следует учитывать тот факт, что клеточные линии, культивируемые на протяжении длительного периода времени, зачастую не сохраняют молекулярные характеристики исходной опухоли [153]. Тем не менее, ксенографты, полученные из клеточных линий, как правило, отличаются более однородной, недифференцированной гистологией.
Одним из активно дискутируемых вопросов является прогностическая значимость моделей опухолей человека и отсутствие значимой корреляции данных, полученных на этих моделях, с результатами клинических исследований [36, 71, 84, 123, 135, 155, 156, 161]. Тем не менее, ретроспективный анализ 3-х доклинических моделей показал, ксенографты опухолей человека обладают сравнительно высокой прогностической значимостью, близкой к моделям in vitro [158]. Проведенный Fiebig и др. анализ прогноза эффективности лечения по результатам, полученным на ксенографтах из биоптатов, выявил высокую положительную корреляцию как с лекарственной чувствительностью (97%), так и с резистентностью (90%) опухолей [49]. Таким образом, можно считать, что эти модели способны достаточно точно прогнозировать клинический ответ на лечение. В целом, ксенографты, полученные из опухолевых клеточных линий или из биоптатов опухолей от пациентов обла-