Исследование биомолекулярных маркеров и активности неоангиогенеза при раке желудка

• Автор: Зорькин, Вячеслав Тимофеевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 131 с. : 47 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Прогноз при раке желудка

1.2 Прогностическая значимость некоторых гистологических типов рака желудка

1.3 Особенности антигена КЗ-67: применение в онкоморфологии

1.4 Диагностическая значимость антигена РСЫА

1.5 Значение антигена р53 при раке желудка

1.6 Ангиогенез в опухоли, его связь с маркером р53, и его диагностическая значимость

1.7 Резюме 28 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы исследования

2.2 Методы исследования 32 ГЛАВА 3. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ РАКА ЖЕЛУДКА:
КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАЛЛЕЛИ
3.1 Корреляционные связи в аденокарциномах и недифференцированном раке маркера Кі-67 с размером опухоли, глубиной инвазии стенки органа, наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах степенью гистологической дифференцировки, возрастом и полом больных при раке желудка
3.2 Корреляционные связи экспрессии маркера РСИА в аденокарциномах и недифференцированном раке желудка с основными клинико-морфологическими параметрами, возрастом и полом больных
3.3 Корреляционные связи индекса мечения с некоторыми

клинико-морфологическими параметрами в аденокарциномах и недифференцированном раке желудка при исследовании маркера р53
3.4 Значение плотности внутриопухолевых микрососудов при некоторых клинико-морфологических параметрах, связь ее с возрастом и полом больных аденокарциномой и недифференцированной карциномой желудка
ГЛАВА 4. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ И АНГИОГЕНЕЗ ПРИ ПРОГНОЗЕ РАКА ЖЕЛУДКА 4Л Маркеры КІ-67, РСКА, р53 и плотность внутриопухолевых сосудов микроциркуляции при карциноме желудка и прогноз
выживаемости
4.2 Поиск пороговых значений индексов мечения раковых клеток маркерами Кг-67, РСИА, р53 и плотности внутриопухолевых сосудов микроциркуляции для прогноза выживаемости при карциноме желудка
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
РЖ - рак желудка
ВДАК - высокодифференцированная аденокарцинома ИМ - индекс мечения
НДАК - низкодифференцированная аденокарцинома НР - недифференцированный рак
УДАК - умеренно дифференцированная аденокарцинома
ИМ р53 - индекс мечения р53 (процентное содержание р53-положительных
клеток)
ИМ Кі-67 - индекс мечения Кі-67 (процентное содержание Кі-67-положительных клеток)
ИМ РСИА — индекс мечения РСИА (процентное содержание РСЫА-положительных клеток)
ВОМС - плотность внутриопухолевых микрососудов
щую ткань на расстоянии 1см от видимой границы опухоли. Весь операционный материал маркировали, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, масть фрагментов в фиксаторе Карнуа при комнатной температуре от 16 до 24 часов. Затем осуществляли спиртово-хлороформовую проводку с последующим заключением в парафин. В морфологическом исследовании операционного материала использовали гистологический, гистохимический и морфометрический методы. При проведении фиксации и методик окрашивания соблюдали строгую стандартизацию.
Гистологический метод. С парафиновых блоков готовили по 3-4 среза толщиной от 3 до 6 мкм, которые помещали на 1 предметное стекло и окрашивали растворами гематоксилина и эозина. Под световым микроскопом срезы исследовали для выявления общей морфологической картины: определяли гистологический тип строения и глубину инвазии стенки желудка, в аденокарциномах - степень гистологической дифференцировки опухоли.
Иммуногистохимическое определение антигенов Ki-67, PCNA, р53 и CD31 проводили в соответствии с общепринятыми рекомендациями [60; 82; 98; 136; 143; 196] пероксидазно-антипероксидазным методом с полимерной системой визуализации DAKOR Kits (хромоген DAB). Для данной методики использовались химически чистые стекла Menzel-Gläser Polysine slides. На стекла монтировали срезы толщиной 4 мкм, приготовленные с парафиновых блоков, и высушивали при 37°С на термостолике в течение 12 часов. Использовали следующие разведения, клоны и стандартные характеристики окрашивания DAB:
Таблица
Характеристика применявшихся иммуногистохимических маркеров
Маркер Антитела Локализация специфического окрашивания Разведе- ние Время инкубации (минуты) Произво- дитель
КІ-67 МІВ 1 .Ядро 1:10 40 DAKO
PCNA PC 10 Ядро 1:2 20 DAKO
р53 DO 7 Ядро 1:20 20 DA КО
CD31 JC 70A Ядро 1:10 30 Bio Genix