Патогенетические механизмы хронической алкогольной зависимости

• Автор: Казанцева, Юлия Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : 9 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Материал и методы исследования

Г лава 2. Клиническая характеристика пациентов 3

Глава 3. Результаты электромиограф ического и лабораторного обследования пациентов

3.1 Результаты электромиографического исследования

3.2 Результаты биохимического анализа крови (КФК, ACT, АЛТ, Г-ГТ) и исследования концентрации IGF-I в плазме крови
Глава 4. Иммуногистохимические и биохимические исследования биоптатов скелетных мышц

4.1 Анализ миоядер и клеток-миосателлитов

4.2 Результаты определения общего количества рибосомальных киназ Р70 S6K и Р90 RSK
Глава 5. Эксперимент с алкоголизацией лабораторных животных

Глава 6. Обсуждение
Выводы
Практические рекомендации
Библиографический список использованной литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛТ - аланинаминотрансфераза
АС - аминокислотная смесь
АСТ - аспартатаминотрансфераза
Г-ГТ - гамма-глутамилтрансфераза
КФК - креатинфосфокиназа
МВ - мышечное волокно
ППС - площадь поперечного сечения
ХАМ - хроническая алкогольная миопатия
ЭМГ - электромиография
ПДДЕ - потенциал действия двигательной единицы
ПФЦ - потенциалы фасцикуляций
ПФ - потенциалы фибрилляций
ЮР-1 - инсулиноподобный фактор роста I
Введение Актуальность проблемы
Хроническая алкогольная миопатия (ХАМ) является одним из частых проявлений алкогольной болезни, и, по данным ряда авторов, встречается у пациентов с хронической этаноловой интоксикацией в 40-60% случаев [77,80]. Клинические симптомы в виде нижнего проксимального парапареза в сочетании с гипотрофией мышц нижних конечностей приводят к нарушению ходьбы и последующей инвалидизации пациентов, что делает изучение данной проблемы актуальным как с медицинской, так и социальной точки зрения.
В настоящее время патогенез ХАМ остается до конца неизученным. В качестве причин возникновения данного состояния рассматриваются глубокие многоуровневые нарушения ростовых и синтетических процессов в мышцах [89,91,121]. Определяющим механизмом их развития, вероятно, является снижение синтеза белка в мышечных волокнах, обусловленное, в первую очередь, снижением интенсивности трансляционных процессов на рибосомах. Скорость трансляции снижается как после острой алкогольной интоксикации, так и на фоне хронического потребления алкоголя [57,115]. Развитие ХАМ не зависит от наличия алкогольной полиневропатии, алкогольного поражения печени, полидефицитарных состояний, гормональных нарушений и напрямую не связано с процессами апоптоза
фирмы Leica (Германия) на срезы толщиной 20 микрометров, которые затем заливали холодным лизирующим буфером (TrisHCl (рН=8,0) 50 mM; NaCl 150 mM; SDS 0,1%; EDTA 10 mM; ß-glycerophosphat 50 Mm; DTT 0,5 mM; EGTA 5 mM; NaF 50 mM; Na3V04 ImM; Aprotinin 10pg/ml; Leupeptin 10pg/ml; Pepstatin 10pg/ml; PMSF ImM). Образцы гомогенизировали и откручивали в центрифуге с охлаждением в течение 10 мин при 15000g (+4°С). Лизаты после этого хранили в аликвотах при -20°С. Содержание
белка в лизатах определяли с помощью стандартной методики Бредфорда.

Перед использованием лизаты смешивали с буфером Laemly. Равное количество белка (20ug) наносили в лунки для последующего разделения с помощью SDS-PAAG электрофореза (электрофорез в полиакриламидном геле). Далее белок переносили на нитроцеллюлозную мембрану (BioRad).
Сначала мембрану блокировали в 5% обезжиренном молоке, разведенном в

PBS-TWEEN, затем последовательно инкубировали с первичными ( антитела против p70S6K либо phospho-p70S6K, либо p90RSK, либо phospho-p90RSK; Abeam) вторичными (конъюгированными с биотином) антителами (Sigma). После этого мембрану инкубировали с конъюгатом стрептавидина с пероксидазой хрена (Sigma). После каждого этапа мембрану отмывали в PBS-TWEEN 3 раза по 5 минут. Интенсивность свечения метки фиксировали на Medical X-ray film с использованием субстрата пероксидазы хрена (BioRad). Измерения проводили с помощью программы обработки изображений Image J.