Неинструментальные иммуноаналитические системы на основе углеродных наночастиц

• Автор: Раев, Михаил Борисович
• Шифр специальности: 14.00.46
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 217 с. : ил.

Светлой памяти любимого Учителя, настоящего Человека, верного Друга Николая Николаевича Кеворкова посвящена эта работа
Автор

Содержание
ВВЕДЕНИЕ

Обзор литературы

Глава 1. Системы аналитического определения

стереоспецифических соединений и их взаимодействий

1.1. Основные этапы развития методов иммуноанализа

1.2. Системы детекции в вариантах упрощенного иммуноанализа

1.3. Форматные аранжировки аналитических систем

1.4. Твердофазные реагенты как компоненты иммуноаналитических 62 систем
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Технология получения диагностических реагентов на
основе углеродных наночастиц
3.1. Основные проблемы существующих систем детекции
3.2. Методические и технологические подходы к получению и 82 оценке свойств частиц коллоидного углерода
3.2.1. Исследование возможных источников углеродных частиц
3.2.2. Методические подходы к исследованию оптических свойств 84 углеродных суспензий
3.3. Разработка метода одноэтапного конъюгирования аффинных
соединений с углеродной меткой
3.3.1. Разработка способа получения устойчивой водной суспензии 87 углеродных частиц
3.3.2. Метод ультразвуковой дезинтеграции в процессе получения 91 стабильного углеродного суспензоида. Подходы к формализации
понятия «оптическая плотность» реагентов
3.3.3. Исследование условий, разработка метода и оценка эффективности синтеза детектирующих реагентов
3.3.4. Особенности синтеза углеродных конъюгатов с использованием поли- и моноклональных антител
3.3.5. Определение рабочей концентрации диагностических реагентов. Расчет титра (рабочего разведения) синтезируемых конъюгатов
3.3.6. Исследование размеров частиц полученных конъюгатов
3.3.7. Исследование стабильности углеродных диагностикумов при хранении
Глава 4. Иммуноаналитические системы на основе С белка, конъюгированного с наночастицами углерода
4.1. Твердофазные реагенты. Способы конструирования, защиты и стабилизации
4.1.1. Способ защиты и стабилизации твердофазных реагентов на основе пористых материалов
4.1.2. Способ защиты и стабилизации твердофазных реагентов на основе непористого материала
4.2. в белок как универсальный анти-лиганд универсальных систем детекции
4.2.1. Прямое определение
4.2.2. Определение антител к ВИЧ-1 и 2 в варианте сэндвич-анализа методом иммунноблотинга
4.2.3. Определение антител к стрептококку группы А (СГА)
4.2.4. Универсальный набор для определения

водных растворах самопроизвольно присоединяются к белкам [Amante et al., 1972]. Альтернативный метод введения метки состоит в том, что краситель растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО), а затем медленно добавляют в раствор белка [Goding, 1976]. От избытка красителя освобождаются гель-фильтрацией. Обычно присоединение флуорохрома к белку происходит за 1,5-2 часа при комнатной температуре.
Иммунофлуоресценцию полезно сравнить с альтернативным иммуногистохимическим методом, в котором меткой для антител служат ферменты. Оба метода обладают сопоставимой чувствительностью и сходны в процедурном отношении, однако при использовании ферментной метки необходим дополнительный этап внесения субстрата для получения окрашенных продуктов реакции. Последние можно регистрировать при помощи обычного микроскопа, тогда, как для флуоресцентной микроскопии необходима существенно более сложная и точная оптическая система [Ekins, 1989, 1990]. Оба типа меток пригодны для методики двойного окрашивания, т.е. обработки образца двумя препаратами, различающимися по специфичности и метке антител, которые окрашивают области локализации антигенов в разные цвета. В то же время, благодаря специальным системам флуоресцентных светофильтров, которые позволяют отдельно регистрировать реакцию с тем и другим препаратом антител, иммунофлуоресценция более удобна для выявления антигенов, локализованных в одной и той же области, особенно если один из них - преобладающий. Большинство наиболее существенных недостатков иммунофлуоресценции, способствовавших в свое время большей популяризации альтернативных методов, сейчас удается устранить. Так, затухание флуоресцентного сигнала при микроскопии и хранении окрашенного образца, которое было неотъемлемой и неразрешимой проблемой, можно существенно замедлить. Было описано применение парафенилендиамина,