Разработка краткосрочной безадъювантной модели экспериментальной IgE-зависимой бронхиальной астмы с использованием аллергена пыльцы тимофеевки

• Автор: Крючков, Николай Александрович
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : 23 ил.

Перечень условных сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Бронхиальная астма человека

1.1.1. Влияние на общественное здоровье

1.1.2. Клетки и медиаторы воспаления

1.1.3. Тх1/Тх2-дисбаланс

1.1.4. Гистологические изменения и ремоделирование дыхательных путей

1.1.5. Генетические факторы предрасположенности

1.1.6. Аллергены и другие внешние факторы

1.2. Моделирование бронхиальной астмы

1.2.1. Общие принципы
1.1.6. Использование животных для моделирования бронхиальной астмы
1.2.3. Овальбуминовые модели на лабораторных мышах
1.2.4. Модели на лабораторных мышах с использованием причинно-значимых аллергенов
1.2.5. Лабораторно-инструментальные методы при моделировании бронхиальной астмы
1.3. Преимущества и недостатки мышиных моделей бронхиальной астмы
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Лабораторные животные
2.2. Аллергены, реагенты и расходные материалы
2.3. Схема иммунизации лабораторных мышей для определения аллергенности экстракта пыльцы тимофеевки
2.4. Схема пилотного эксперимента для определения оптимальной сенсибилизирующей дозы аллергена пыльцы тимофеевки

2.5. Схема эксперимента для проверки эффективности сниженной интраназаль-ной дозы экстракта пыльцы тимофеевки
2.6. Схема эксперимента для подтверждения сенсибилизирующей активности экстракта пыльцы тимофеевки в дозе 20 мкг/мышь (краткосрочная модель экспериментальной бронхиальной астмы)
2.7. Определение антиген-специфических Е-антител методом пассивной кожной анафилаксии
2.8. Оценка клеточного состава периферической крови
2.9. Методика получения бронхоальвеолярного лаважа у лабораторных мышей и оценка его клеточного состава
2.10. Приготовление микропрепаратов легких и их гистологическое исследование
2.11. Пневматахографическая оценка функции внешнего дыхания мышей при введении неспецифического бронхоконстриктора
2.11.1. Пневматахографическая установка
2.11.2. Регистрация и анализ пневматахограмм
2.12. Методы статистического анализа
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Динамика образования специфических 1§Е-антител при трехкратной иммунизации мышей аллергеном тимофеевки и его комбинациями с адъювантами
3.2. Подбор оптимальной дозы аллергена пыльцы тимофеевки для моделирования экспериментальной бронхиальной астмы
3.3. Проверка эффекгавности сниженной дозы экстракта пыльцы тимофеевки (250 мкг/мышь) при моделировании экспериментальной бронхиальной астмы
3.4. Характеристика разработанной модели
3.4.1. Динамика содержания анти-Сб Е-антител в сыворотке крови
3.4.2. Относительный клеточный состав периферической крови
3.4.3. Относительный клеточный состав бронхоальвеолярного лаважа

3.4.4. Гистологическое исследование легких
3.4.5. Оценка функции внешнего дыхания с использованием метахолина
Глава 4. Обсуждение полученных результатов
Глава 5. Выводы
Список литературы

суррогатного показателя Penh по динамике и величине изменения давления воздуха в изолированной камере с находящимся внутри нее животным (общая плетизмография - whole-body plethysmography). Применение метода стало возможным благодаря выявлению высокой сопоставимости прямой оценки степени бронхоконстрикции и величины Penh. Однако ряд исследователей высказывают сомнения в возможностях неинвазивных методик [25,126]. Недавно появившийся полуинвазивный метод сочетает в себе преимущества двух описанных выше. Так, напрямую оценивается бронхиальное сопротивление и нет потребности в глубокой интубации и катетеризации вен, а мета-холин доставляется в форме аэрозоля. По-видимому, в скором времени стоит ожидать широкого распространения этого метода оценки ФВД у лабораторных животных. Преимущества и недостатки групп методов оценки ФВД представлены в таблице 1.4.
Находят применения и ех vivo-методы, оценивающие констриктивную активность и биомеханику гладкомышечных клеток дыхательных путей. Для изолированного исследования сократимости бронхо-альвеолярного дерева проводят выделение трахеи с последующим ее помещением в электропроводящий раствор и оценкой констриктивности в ответ на электрические и химические стимулы. Микромеханика гладкомышечных клеток оценивается на их культуре методом магнитной цитометрии. При повышении ригидности снижается амплитуда вращения глакомышечных клеток, покрытых ферромагнитными шариками, в переменном магнитном поле.
Помимо перечисленных методов, используемых для описания мышиных моделей Б А, существует еще ряд других, как то: оценка пролиферативной активности клеток селезенки мышей в ответ на специфические и неспецифические стимулы (наиболее часто, по уровню включения 3Н-тимидина), определение интерлейкинового спектра в супернатанте культуры лимфоцитов, выявление уровня экспрессии генов в клетках иммунной системы и т.д.