Изучение экспрессии генов, контролирующих суточные ритмы, в гемопоэтических стволовых клетках и клетках-предшественниках костного мозга

• Автор: Цынкаловский, Олег Ростиславович
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : 22 ил.

Моим родителям
ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
Основные задачи работы
Научная новизна
Теоретическая и практическая значимость
Положения, выносимые на защиту
Апробация работы
Публикации
ФОРМИРОВАНИЕ ЦИРКАДНЫХ РИТМОВ (обзор литературы)
Общие сведения о циркадных ритмах
Молекулярные компоненты внутренних часов. Современная модель формирования внутриклеточных ритмов
Механизмы формирования циркадных ритмов в организме
Центральный пейсмейкер
Формирование ритмов в периферических тканях и органах
Регуляция clock генами различных клеточных функций
Механизмы регуляции физиологических процессов внутренними часами
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты на мышах
Животные
Окрашивание клеток костного мозга мышей Hoechst 33342
Определение способности кроветворных клеток мышей образовывать колонии in vitro
Эксперименты на рыбах Danio rerio
Рыбы
Цитология
Миелосупрессивная терапия
Эксперименты на костном мозге человека
Доноры
Выделение клеток костного мозга человека
Заморозка клеток
Изолирование СБ34+-клеток костного мозга человека с помощью магнитных микрочастиц
Получение сыворотки
Проточная цитометрия: анализ и высокоскоростная
сортировка клеток
Анализ кроветворных клеток мышей
Анализ кроветворных клеток рыб Danio rerio
Анализ кроветворных клеток человека
Высокоскоростная сортировка клеток
Выделение РНК и определение экспрессии генов методом количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией
Выделение РНК
Обратная транскрипция РНК

локальными факторами. Подобная организация периферических часов представляется биологически оправданной. Основные процессы, происходящие в различных тканях должны координировться во времени соответственно специфическим для данной ткани стимулам. Например, в печени изменяется метаболизм питательных веществ координированно с поступлением пищи, в почках эфффсктивно изменяется фильтрация и реабсорбция воды и электролитов соответственно циклам сна-бодрствования и т.д.
Следует отметить, что кроме метаболических процессов, участие внутренних часов в регуляции многих других функций остаются крайне мало изученным. Например, получено немало данных о том, что процесс кроветворения координируется во времени [Бтаакпб Л., й а1., 2002]. Циркадные ритмы выявлены в изменениях количества стволовых клеток и клеток-предшественников, выделяемых в течение суток из костного мозга добровольцев [АЬгаЬашзеп е! а1., 1998], в синтезе ДНК и уровнях пролиферации клеток-нредшественников костного мозга различных линий [БтааПпс! Л., Н а!., 1992, 8таа1апс1 Л., й а1., 1995] и в способности клеток костного мозга образовывать колонии в организме летально облученных рецепиентов [П'Нопск Ь., е! а!., 2004]. Однако, до сих пор не исследовано, как происходит координация во времени гемопоэза в костном мозге.
Описательный характер носят и хронобиологические исследования системы иммунитета. Показано, что многие составляющие системы клеточного и гуморального иммунитета [Петров Р. В., 1987, Хаитов Р. М., 2006] (количество Т- и В-лимфоцитов, концентрации иммуноглобулинов и интерлейкинов, изменения количества фагоцитов и их функциональной активности, общее количества лейкоцитов периферической крови) регулируются циркадными ритмами [Бородин Ю. И. и др., 1992]. Однако, данные о механизмах такой регуляции иммунной системы отсутствуют.