Лечение резистентных и осложненных форм множественной миеломы с учетом чувствительности опухолевых клето in vitro

• Автор: Трифонова, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 14.00.29
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ПРИ

МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ

1.1 .Механизмы развития лекарственной

устойчивости

1.2. Пути преодоления лекарственной

устойчивости

ГЛАВА II. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ
ГЛАВА III. ЛЕЧЕНИЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ,
ОСЛОЖНЕННОЙ ВНУТРИСПИНАЛЬНЫМ
ОПУХОЛЕВЫМ РОСТОМ, ИНТРАТЕКАЛЬНЫМИ ВВЕДЕНИЯМИ
ЦИТОЗАРА ПО ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ IN VITRO
ГЛАВА IV. ТЕРАПИЯ РЕЗИСТЕНТНЫХ БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ САРКОЛИЗИНОМ ПО ПРИНЦИПУ ДОЗОВОГО ПРЕИМУЩЕСТВА С УЧЕТОМ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ IN VITRO
ГЛАВА V. КЛИНИЧЕСКАЯ И ФАРМАКОДИНАМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ БИСФОСФОНАТОВ IN VITRO ПРИ
МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращении
САМ -клеточные молекулы адгезии
CD -кластер дифференцировки
GSH -система глутатиона
Ig -иммуноглобулин
IL -интерлейкин
к,Х -типы легких цепей иммуноглобулинов
LD -летальная доза
LRP -белок, определяющий множественную лекарственную
устойчивость
MRP -белок, ассоциированный с множественной лекарственной
устойчивостью Pgp -Р-гликопротеин
PI -пропидий йодид
Pig -парапротеин
TRAIL -TNF-related apoptosis inducing ligand
в/в - внутривенно
Гр -Грей
ИТ XT - интратекальная химиотерапия
КС - корешковый синдром
КТ - компьютерная томография
МЛУ -множественная лекарственная устойчивость
ММ - множественная миелома
МРТ - магнитно-резонансная томография
HIT - нижний парез
ПНП - полинейропатия
ПХТ - полихимиотерапия
СМЖ -спинномозговая жидкость
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Наибольшую актуальность в проблеме повышения противоопухолевой эффективности химиотерапии множественной миеломы (ММ) представляют резистентные формы заболевания. Частота первичной резистентности ММ при оценке ответа на лечение по 50% редукции Pig составляет примерно 20% случаев, а вторичная резистентность после второго рецидива отмечается практически у всех больных (Андреева Н.Е., 1995, Голенков А.К., 1995). В настоящее время данная проблема разрабатывается по нескольким направлениям и включает в себя изучение клинической эффективности новых противоопухолевых препаратов с различными механизмами действия, создание более эффективных химиотерапевтических программ на основе их комбинаций, высокодозную химиотерапию с пересадкой аутологичных и аллогенных стволовых кроветворных клеток, а также лечение синдромов ММ, осложняющих течение заболевания.
Определение чувствительности опухолевых клеток при лейкозах к цитостатическим препаратам in vitro (Kaspers G.J.L., Veerman A.J.P., 1997) также можно рассматривать как актуальное направление в преодолении резистентности миеломных клеток к противоопухолевым препаратам. Причем функция этого подхода достаточно широкая и заключается в скрининговом поиске новых противоопухолевых препаратов с высокой активностью против миеломы (Yasui Н. et al, 2004; Mitsiades C.S. et al, 2004), создании эффективных комбинаций цитостатико в (детерминированный по чувствительности in vitro принцип), что значительно эффективнее, чем эмпирический подход. Это подтверждается работами Berenson J.R., 2004, показавшими in vitro, что комбинация триоксида мышяыса (АТО), мелфалана и аскорбиновой кислоты создает более глубокий противоопухолевый эффект, чем каждый препарат в отдельности или комбинация из двух препаратов.

черный цвет. «Живые» опухолевые и нормальные клетки окрашивались стандартно. Процент живых опухолевых клеток вычисляли по формуле: Nixl00%
N0= N!+N2+N3
No - процент живых опухолевых клеток
Nj - число живых опухолевых клеток
N2 - число мертвых клеток
N3 — число живых нормальных клеток
Для каждого препарата строили график зависимости «доза-эффект» и определяли IC70 (концентрация химиопрепарата, при которой наступает гибель 70% опухолевых клеток).
Работа проводилась совместно с научным сотрудником А.Н. Иншаковым.
2.1.2. Определение апоптотических клеток по окрашиванию ДНК пропидий йодидом методом проточной цитофлуориметрии Метод основан Fia феномене экстракции низгсомолекулярных фрагментов ДИК из клеток в процессе их фиксирования спиртами, в результате чего фиксированные «остатки» апоптозных клеток содержат меньшее количество ДНК (гиподигоюцдные клетки), чем «остатки» интактных клеток и, соответственно связывают меньше PI, флюоресцируя с меньшей интенсивностью. Снижение содержания ДНК ниже диплоидного регистрируется на гистограмме в виде добавочного пика, расположенного левее пика диплоидных клеток.
Апоптотические клетки определяли по методу Nicoletti I. [91]. Плазматические клетки, выделенные из гепаринизированного костного мозга больных ММ, в количестве 1,0х105 инкубировали в плоскодонных 96-ти луночных планшетах (Falcon 3072, Becton Dickinson) с различными концентрациями бисфосфонатов: клодроната (бонефос, «Шеринг АГ», Германия) -20, 30, 40, 50, 60 рМ и 10, 100 и 1000 рМ и золендроновой