Противовоспалительные свойства нового растительного препарата артрофлекс и анализ механизма его действия

• Автор: Рыдловская, Анастасия Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 159 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Характеристика синтетических противовоспалительных ПРЕПАРАТОВ

1.1.1 Стероидные противовоспалительные препараты

(глюкокортикоиды)

1.1.2. Нестероидные противовоспалительные препараты

1.2. Фармакологическая активность компонентов препарата артрофлекс

1.2.1 Специфическая фармакологическая активность

экстрактов Boswellia serrata

1.2.2 Специфическая фармакологическая активность

экстрактов Curcuma longa

1.2.3 Специфическая фармакологическая активность экстракта семян Pinus Sibirica
ГЛАВА II: МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Обоснование выбора моделей исследования противовоспалительных свойств препарата артрофлекс in vivo
2.1.1 Модель каррагенинового отека
2.1.2 Модель формалинового отека
2.1.3 Модель адъювантного артрита
2.2 Модели, используемые при определении механизмов действия препарата артрофлекс
2.2.1 Оценка ЛПС-индуцированной продукции TNFa, IL-6 и IL-lß
макрофагами человека линии ТНР
.2-2.2 Оценка индуцированной ex vivo продукции фактора некроза опухолей-а и простагландина Е2 в крови животных
2.2.3 Определение транскрипционной активности NF-kB
2.2.4 Оценка ЛПС-индуцированного фосфорилирования МАР-киназ р38, JNK и ERK1/2 in vitro
2.2.5 Оценка ЛПС-индуцированной активации MAP-киназ р38, JNK1/2 и ERK1/2 в легком, селезенке, костном мозге бедренной кости и продукции фактора некроза опухолей-а в крови животных
2.3 Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА АРТРОФЛЕКС IN VIVO

3.1 Оценка противовоспалительной, анальгетической и АНТИПИРОГЕННОЙ АКТИВНОСТЕЙ АРТРОФЛЕКСА НА МОДЕЛИ КАРРАГЕНИНОВОГО ОТЕКА У КРЫС
3.2 Оценка противовоспалительной, анальгетической и
АНТИПИРОГЕННОЙ АКТИВНОСТЕЙ АРТРОФЛЕКСА НА МОДЕЛИ ФОРМАЛИНОВОГО ОТЕКА У КРЫС
3.3 Определение противовоспалительного действия и безопасности препарата артрофлекс на модели адыовантного артрита у крыс
3.3.1 Влияние артрофлекса на хроническое воспаление суставов
3.3.2 Побочные действия артрофлекса
ГЛАВА IV. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА АРТРОФЛЕКС
4.1 Изучение влияния препарата артрофлекс на ЛПС-индуцированную продукцию фактора некроза опухолей-а, интерлейкина-1 в и интерлейкина-6 in vitro
4.2 Изучение влияния перорального введения препарата артрофлекс крысам на индуцированную ex vivo продукцию фактора некроза опухолей-а и простагландина Е2 в крови животных
4.3 Изучение влияния препарата артрофлекс на TNFa-индуцированную активацию ядерного фактора кВ В КЛЕТКАХ линии НЕК293
4.4 Изучение влияния препарата артрофлекс на ЛПС-индуцированную АКТИВАЦИЮ МИТОГЕН-АКТИВИРОВАННЫХ (МАР)-КИНАЗ (р38, JNK, ERK1/2) В моноцитах человека линии U937
4.5 Изучение влияния перорального введения препарата артрофлекс крысам линии Вистар НА ЛПС-ИНДУЦИРОВАННУЮ АКТИВАЦИЮ МАР-киназ р38, JNK1/2 И ERK1/2 В легком, селезенке и костном мозге, а также ПРОДУКЦИЮ фактора некроза опухолей-а В КРОВИ ЖИВОТНЫХ
4.6 Изучение влияния перорального введения препарата артрофлекс крысам на перекисное окисление ЛИПИДОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ
ГЛАВА V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. АКТ О ВНЕДРЕНИИ НИР ОТ 23.05.2007
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. АКТ О ВНЕДРЕНИИ НИР ОТ 30.07.2007

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АБК - ацетил-Р-босвеллиевая кислота
AKfffiK - ацетил-11-кето-Р-босвеллиевая кислота
БК - Р-босвеллиевая кислота
ГК - глюкокортикоид
ГР - глкжокортикоидные рецепторы
дмсо - диметилсульфоксид
ДФМ - диферулоилметан
жкт - желудочно-кишечный тракт
КБК - 11-кето-Р-босвеллиевая кислота
лпс - липополисахарид
МАРК - mitogen-activated protein kinases - митоген-активированные протеинкиназы
нпвп - нестероидные противовоспалительные препараты
пол - перекисное окисление липидов
скс - семена сосны кедровой сибирской
соэ - скорость оседания эритроцитов
ТБК-РП - продукты, реагирующие с 2'- тиобарбитуровой кислотой
цАМФ - циклический аденозин монофосфат
АР-1 - активационный белок
СОХ-2 - циклоксигеназа-2 (ЦОГ-2)
ERK - extracellular signal-regulated kinase - экстраклеточные сигнал-зависимые киназы
GRE - глюкокортикоид-ответственный элемент
ICAM-1 - intercellular adhesion molecule - молекула межклеточной адгезии
IFNy - интерферон-у
IL-ip - интерлейкин-1 Р
IL-б - интерлейкин-б

(РАА, Австрия) и 80 мкг/мл гентамицина. За сутки до трансфекции клетки рассевали на 24-луночные платы из расчета 1 чашка диаметром 6 см (площадь покрытия клетками - 70-80%) на одну 24-луночную плату. В результате, непосредственно перед трансфекцией клетки в лунках достигали субконфлюентного состояния (площадь покрытия клетками - 70-80%).
2.2.3.2 Трансфекция
В качестве трансфецирующего агента использовали реагент TransFast (Promega, США), а в качестве репортерного гена использовали плазмиду, содержащую ген люциферазы под контролем промотора NF-kB (NF-kB cis-Reporting system, Promega, США). Процедуру трансфекции проводили в соответсвии с инструкцией фирмы Promega в стерильных условиях.
2.2.3.3 Обработка препаратом и стимуляция
Через сутки после трансфекции плазмид клетки инкубировали с препаратом артрофлекс и специфическим ингибитором NF-kB (Вау 11-8072, Sigma). Через 16 часов инкубации при 37 °С в атмосфере 5 % ССЬ, клетки обрабатывали TNFa (100 нг/мл; 4 часа при 37°С и 5% С02).
2.2.3.4 Лизис трансфецированных клеток
После обработки препаратом и стимуляции TNFa трансфецированные клетки промывали 2 раза холодным фосфатно-солевым буфером (рН=7.4) (по 200 мкл на лунку) и лизировали в буфере LLB (Luciferase Lysis Buffer) (100 мкл на лунку). После этого платы ставили на орбитальный шейкер и инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Полученные лизаты переносили в эппендорфы и центрифугировали для осаждения нерастворимых остатков клеток (5 мин, 16000g, 4 °С). В жидкой фракции определяли уровни экспрессии генов люциферазы и р-галактоидазы.