Оценка биологической полноценности ооцитов свиней на основе маркеров ядерно-цитоплазматического созревания

• Автор: Мурза, Галина Валерьевна
• Шифр специальности: 06.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург, Пушкин
• Количество страниц: 121 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Фолликулогенез свиней

1.1.1. Механизмы, регулирующие фолликуло- и оогенез свиней, в зависимости от степени половой и физиологической
зрелости

1.2. Фундаментальные основы мейотического созревания ооцитов млекопитающих

1.2.1. Преобразования хроматина при созревании

ооцитов
1.2.2. Цитоплазматические изменения в процессе формирования зрелой яйцеклетки
1.2.3. Роль митохондрий и других органелл в созревание
ооцитов
1.3. Биологические и технологические аспекты созревания ооцитов и получения эмбрионов свиней in
vitro
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материал исследований
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение фолликулов, фолликулярной жидкости и ооцит-кумулюсных комплексов из яичников
свиней
2.2.2. Морфометрический анализ популяции
фолликулов

2.2.3. Окраска ооцитов бриллиантовым кристаллическим
красителем
2.2.4. Определение уровня содержания кальция в ооцитах
свиней
2.2.5. Оценка функционального состояния митохондрий в ооцитах свиней с использованием флуоресцентных зондов
2.2.6. Культивирование ооцит-кумулюсных
комплексов
2.2.7. Оплодотворение яйцеклеток свиней in vitro
2.2.8. Культивирование эмбрионов свиней
2.2.9. Оценка состояния ядерного материала в клетках гранулезы и кумулюса
2.2.10. Цитогенетический анализ хроматина ооцитов
эмбрионов
2.2.11. Микроскопирование, микрофотосъемка и статистическая обработка полученных данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Морфометрическая характеристика популяции овариальных фолликулов
свиней
3.2. Оценка статуса хроматина соматических клеток антральных
овариальных фолликулов и уровня содержания кальция в
ооцитах
3.3. Родамин 123 как маркер функционального состояния митохондрий в ооцитах свиней
3.4. Бриллиантовый кристаллический краситель, как индикатор активности глюкозо- 6 -фосфатдегидрогеназы в ооцитах свиней
3.4.1. ВСВ-диагностика популяции ооцитов свиней, выделенных из фолликулов разного диаметра
3.5. Моделирование систем дозревания и оплодотворения ооцитов свиней

vitro
3.5.1. Морфология и статус хроматина клеток кумулюса при их
культивировании в различных системах
3.6. Культивирование ооцитов свиней в различных
системах
3.6.1. Исследование роли фолликулярной жидкости и структурных элементов фолликула в формировании зрелой яйцеклетки in
vitro
3.6.2. Использование MitoTracker Orange CMTMRos для оценки адекватности систем дозревания ооцитов свиней in
vitro
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

TIMP-1 увеличивается. Предполагают, что присутствие TIMP-1 в 20-44 часовой культуре при созревании ооцитов свиней способствует приобретению ими компетентности к развитию до стадии бластоцисты. Полученные данные свидетельствуют о наличии соматических сигналов, влияющих на созревание ооцита, а также предполагают то, что эффекты, которые они вызывают во время созревания ооцита, не проявляются до формирования бластоцисты. Модификация условий во время IVM, позволит значительно увеличить выход бластоцист после IVM, IVF. В настоящее время более 30 % IVM ооцитов свиней, могут развиваться до стадии бластоцисты [71]. Альтернативный подход в созревании ооцитов in vitro - это культивирование незрелых фолликулов до стадии зрелых ооцитов. Данный подход позволил бы получать большое количество донорских ооцитов для целей клеточной и генной инженерии. Он уже успешно использовался во время культивирования примордиальных фолликулов мышей [61]. Системы для культивирования преантральных фолликулов свиней не достаточно разработаны [78], частично из-за их больших размеров. Известны данные о том, что культивирование преантральных фолликулов мышей в течение 16 дней, позволило выделить из них мейотически компетентные ооциты [87].
Клеточные комплексы, ооцит - гранулеза, выделенные из яичников овец, были выращены in vitro до размера антральных и содержали жизнеспособные ооциты [154], а при культивирование преантральных фолликулов свиней в течение 30 дней, отмечалось формирование антрума и наличие жизнеспособных ооцитов. О подобных результатах сообщили Shen и др., используя ОКК свиней, выделенные из ранних антральных фолликулов [180]. Первые успехи сделаны, дальнейшее совершенствование систем дозревания облегчит понимание механизмов, регулирующих рост фолликулярных клеток и ооцита. Эффективное созревание (IVM) in vitro необходимо для успешного получения эмбрионов in vitro . Во время IVM, ооциты подвергаются ядерным и