Разработка тест-системы на основе маркированного штамма "ВК" для диагностики болезни Ауески

• Автор: Мифтахов, Нияз Рафисович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 126 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БА - болезнь Ауески (псевдобешенство)

ВБА - вирус болезни Ауески

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации

РВН - реакция вируснейтрализации

ИФА - иммуноферментный анализ

НГУК-1 - невринома Гассерова узла крысы

ВНК-21 - перевиваемые клетки почек сирийского или золотистого хомячка

ККФ - культура клеток куриных фибробластов

СПЭВ - перевиваемые клетки почек эмбрионов свиней

ЦПД - цитопатогенное действие
ПЭГ - полиэтиленгликоль
ЭД - эритроцитарный диагностикум

Содержание

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Характеристика болезни Ауески и биология возбудителя
2.2. Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески
2.3. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы исследований
3.1.1. Материалы
3.1.2. Методы исследований
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Разработка технологии изготовления антигена вируса
болезни Ауески, делеционного по гликопротеину gE
4.1.1. Сравнительное изучение чувствительности культур клеток к варианту вируса болезни Ауески делеционного по гликопротеину gE и ВГНКИ
4.1.2. Очистка и концентрирование вируса псевдобешенства
4.2. Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РИГА на основе делеционного по гликопротеину gE штамма "ВК" вируса болезни Ауески
4.2.1. Получение специфических сывороток крови кроликов и крыс, иммунизированных против болезни Ауески различными вакцинными штаммами
4.2.2. Получение эритроцитарного реагента
4.2.3. Сенсибилизация эритроцитов антигеном различных штаммов вируса болезни Ауески

4.2.4. Определение активности и специфичности серий эритроцитарных диагностикумов в межлабораторных комиссионных испытаниях
4.3. Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител у свиней
4.4. Сопоставительный анализ результатов РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма вируса болезни Ауески штамма «В К» при определении антител в сыворотках крови
иммунизированных животных
4.5. Практическое использование существующих и разработанных методов и средств для иммунологического мониторинга эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
9. ПРИЛОЖЕНИЯ

Принцип метода основан на визуальном учете специфического взаимодействия меченных ферментом (пероксидазой из хрена и др.) антител с гомологичным антигеном. ИФА занимает ведущее место среди диагностических тестов, поскольку сочетает простоту постановки, технологичность с высокой чувствительностью и специфичностью.
ИФА применяют для выявления вируса болезни Ауески (Ильясова Г.Х., и др., 1983; Сакович В.Т., Антоненко А.Е., 1989; Корниенко JI.H., 1992; Мищенко В.А. и др., 1994; Windberger U. et.al., 1988), а также для обнаружения и титрования антител с целью диагностики и оценки эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески (Ильясова Г.Ф., и др., 1998; Юсупов Р.Х., Ильясова Г.Х., 2000; Afshar A. et.al., 1987; Rustleben W.P. et.al., 1988; Kretzschmar С. et.al., 1988; Iglesias G., Trujano М., 1989; Eloit M. et.al., 1989; Kinker D.R. et.al., 1997).
В качестве иммуногенов для гипериммунизации животных длительное . время использовали суспензию паренхиматозных органов кроликов и овец, зараженных эпизоотическим штаммом вируса болезни Ауески (Соломкин П.С., 1949; Сергеев В.А.и др., 1987).
Для этих целей также использовали суспензию ткани куриных эмбрионов, зараженных адаптированным к ним вирусом болезни Ауески (Базылев П.М. и др., 1966; Сергеев В.А. и др., 1987). Преимущество антигена вируса, приготовленного из ткани куриных эмбрионов, при производстве сывороток было весьма значительным. Титр вируса БА в ткани куриных эмбрионов составил 105-107 ЭЛД50/счз, тогда как титр вируса в паренхиматозных органах кроликов составил 103 ТЦД50/ СмЗ> а титр вируса в паренхиматозных органах овец был еще меньше.
Известно, что в качестве антигена для серологических реакций длительное время использовались спиртовые и водные экстракты из тканей, содержащих вирус болезни Ауески (мозг, селезенка, печень) (Айрапетян В.Г., 1967; Цымбал А.М. и др., 1953). Однако количество балластных белков в этих антигенах оставалось значительным. Это послужило основанием к дальней-