Получение анатоксинов Actinobacillus pleuropneumoniae и изучение их свойств

• Автор: Лебедев, Никита Викторович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 135 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения об актинобациллезной плевропневмонии свиней

1.2. Возбудитель болезни

1.2.1. Общие свойства возбудителя

1.2.2. Патогенность и вирулентность

1.2.3. Диагностика актинобациллезной плевропневмонии свиней

1.3. Бактериальные токсины и их свойства

1.4. Анатоксины и их применение в ветеринарии

1.5. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. МАТЕРИАЛЫ
2.1.1. Штаммы и изоляты микроорганизмов
2.1.2. Растворы и реактивы
2.1.3. Оборудование
2.1.4. Питательные среды
2.1.5. Краски для микроскопических исследований
2.1.6. Подопытные животные
2.1.7. Адъюванты
2.2. МЕТОДЫ
2.2.1. Культивирование бактерий
2.2.2. Световая микроскопия
2.2.3. Определение числа живых микроорганизмов
2.2.4. Биохимические свойства
2.2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.2.6. КАМП-тест
2.2.7. Получение токсинов Л. р1еигорпеитотае
2.2.8. Приготовление эритроцитов
2.2.9. Определение гемолитической активности штаммов

А.р1еигорпеитотае
2.2.10. Реакция гемолиза и реакция нейтрализации гемолизина
2.2.11. Получение первичной культуры альвеолярных
макрофагов свиньи
2.2.12. Определение титра цитотоксина
2.2.13. Получение нормальной и специфической сывороток крови лабораторных животных
2.2.14. Определение антигенной и иммуногенной активности экспериментального образца анатоксина против актинобациллезной плевропневмонии свиней
2.2.15. Статистика
2.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.3.1. Разработка лабораторного метода получения экзотоксинов АсНпоЬасШт р1еигорпеитотае и изучение их биологических свойств
2.3.1.1. Определение гемолитической активности различных серотипов А.р1еигорпеитотае
2.3.1.2. Изучение динамики накопления гемолизина в процессе культивирования штамма АТСС 27088 А.р1еигорпеитотае первого серотипа
2.3.1.3. Гемолитическая активность штаммов АТСС 27088 (1 серотип) и 27089 (2 серотип) А.р1еигорпеитотае с эритроцитами барана и
кролика
2.3.1.4. Влияние концентрации хлористого кальция на активность гемолизина А.р1еигорпеитотае
2.3.1.5. Влияние различных физических и химических факторов на сохранение гемолитической активности гемолизинов А.р1еигорпеитотае 1 серотипа
2.3.1.6. Определение наличия у бактерий А.р1еигорпеитотае ко-гемо лизина
2.3.1.7. Выделение экзотоксина сульфатом аммония
2.3.1.8. Цитотоксическая активность штаммов АТСС 27088 (1 серотип) и 27089 (2 серотип) A.pleuropneumoniae
2.3.1.9. Выделение экзотоксинов методом двухступенчатой
ультрафильтрации
2.3.2. Разработка схемы получения анатоксина Actinobacillus pleuropneumoniae
2.3.2.1. Схема получения актинобациллезного анатоксина
2.3.3. Изучение иммунобиологических свойств анатоксина Actinobacillus pleuropneumoniae
2.3.3.1. Реакция диффузионной преципитации сывороток иммунизированных кроликов с экстрактами токсинов A. pleuropneumoniae, St. aureus и Е. coli
2.3.3.2. Получение экспериментального образца анатоксина Actinobacillus pleuropneumoniae в смеси с адьювантом
2.3.3.3. Определение безвредности и реактогенности полученного экспериментального образца анатоксина на лабораторных животных и свиньях
2.3.3.4. Изучение антигенных и иммуногенных свойств экспериментального образца анатоксина на лабораторных животных и свиньях
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Анализ российского рынка средств специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии показывает, что на данный момент сельхозпроизводители в целях превенции обычно используют инактивированные вакцины, содержащие цельные бактериальные клетки (бактерии) или анатоксины. Одним из существенных недостатков бактеринов являются сопутствующие серьезные поствакцинальные реакции. Кроме того, результатом иммунизации свиней корпоскулярной вакциной является прежде всего антительный ответ, напрвленный против липополисахаридов, которые являются специфичными для определенного серотипа А.р1еигорпеитотае и следовательно не является защитными против другого серотипа. По данным зарубежных исследователей только анатоксин-вакцины способны индуцировать напряженный и продолжительный иммунитет у свиней против всех известных серотипов возбудителя.
В связи с вышеизложенным актуальными остаются вопросы получения, концентрирования, а также всестороннего изучения анатоксинов А. р1еигорпеитотае с целью возможного их использования в качестве компонетов иммунобиологических препаратов.