Молекулярно-биологическая характеристика бактерий семейства Pasteurellaceae и частота их выявления при респираторных болезнях крупного рогатого скота

• Автор: Терентьева, Татьяна Евгеньевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 142 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Общая характеристика и классификация бактерий семейства

Pasteu.rella.ceae

1.2 Особенности распространения болезней крупного рогатого скота,

вызываемых бактерией Р. тикосісіа серотипов В, Е и Г

Е2Л Культурально-морфологические, патогенные свойства

и биохимическая характеристика бактерии Р. тикосісіа серотипов В, Е и Б

1.2.2 Лабораторная диагностика болезни, вызываемой бактерией

Р. тикосісіа серотипов В, Е и Б

1.3 Особенности распространения болезней крупного рогатого скота,
вызываемых бактерией Р. тикосісіа серотипов А и Е)
1.3.1 Культурально-морфологические, патогенные свойства
и биохимическая характеристика бактерии Р. тикосісіа серотипов А и Б
1.3.2 Факторы вирулентности Р. тикосісіа и их роль в возникновении
и патогенезе болезни
1.3.3 Клинические признаки и патологоанатомические особенности
болезней, вызываемых бактерией Р. тикосісіа
1.3.4 Лабораторная диагностика болезней, вызываемых бактерией
Р. тикосісіа серотипов АиБ
1.4 Молекулярная диагностика болезней крупного рогатого скота,
вызываемых бактериями семейства Раяіеигеїїасеае
1.5 Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы

2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.
2.2.4.

Результаты исследований
Частота выделения бактерий сем. Раз1еиге11асеае на молочных
комплексах
Культурально-морфологические признаки, биохимические и патогенные свойства бактерий сем. РазгеигеИасеае, выделенных от животных при вспышках респираторных
болезней на молочных комплексах
Чувствительность бактерий сем. PasteureПaceae, выделенных от
КРС, к антибактериальным препаратам
Разработка мультиплексной ПЦР для выявления и дифференциации бактерий сем. Pasteurellaceae, выделенных
от крупного рогатого скота
Подбор праймеров для постановки ПЦР
Подбор режима амплификации, определение чувствительности и специфичности праймеров
Чувствительность мультиплексной ПЦР
Влияние сроков хранения культур бактерий и их ДНК
на пригодность к исследованию в ПЦР
Типирование культур Р. тикойс1а, выделенных от крупного
рогатого скота при помощи мультиплексной ПЦР
Эффективность мультиплексной ПЦР на различных этапах бактериологической диагностики болезней, вызванных
Р. тгШос1с1а
Частота выявления бактерий сем. Раз1еиге11асеае при помощи мультиплексной ПЦР у больных животных в производственных
условиях
Экономическая эффективность ПЦР

3. ОБСУЖДЕНИЕ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЯ

ризованных бактериологическими методами: S. dublin, S. typhimurium, E. coli, в концентрации!О8 КОЕ/мл.
Для изучения эффективности ПЦР в производственных условиях исследовали 260 проб биоматериала от больных животных из хозяйств трех регионов Сибири. В том числе: 161 пробу легких, 54 - бронхиальных лимфоузлов и 45 - селезенки.
Изучение пригодности выделенных культур бактерий и их ДНК для исследования в ПЦР. Суспензии внутренних органов животных, выделенных культуры бактерий, внутренних органов мышей после постановки биопробы и реизолированных культур, а также выделенные ДНК хранили при - 18°С в пластиковых пробирках в течение 6 мес. Пробы извлекали через каждые 30 дней и исследовали в ПЦР.
Подробные методики исследований приведены по мере изложения материалов собственных исследований в начале соответствующих подразделов.
Математические расчеты. Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки с использованием программы «Microsoft excel», входящей в пакет программ «Microsoft Office 7,0». Экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий определяли согласно «Методическим рекомендациям по определению экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденным ГУВ МСХ и ПРФ 21.02.1997 г. и «Методическим рекомендациям по оценки социально-экономической эффективности применения метода биочип-диагностики во фтизиатрии», Москва, 2009.
Для определения эффективности метода ПЦР на различных этапах бактериологической диагностики рассчитывали коэффициент (к) совпадения результатов (J.L. Fleiss, 1981).