Индикация факторов вирулентности энтеробактерий, дифференциальная диагностика эшерихиоза птиц

• Автор: Плотникова, Елена Михайловна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 164 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиологическая структура бактериальных болезней птиц

1.2. Факторы патогенности энтеробактерий

1.3. Эпизоотологические данные, патогенез, иммунитет болезней птиц,

вызываемых патогенными энтеробактериями

1.4. Диагностика и профилактика болезней птиц, вызваемых патогенными

энтеробактериями

1.5. Заключение по обзору литературы

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Эпизоотологические и клинико-морфологические методы исследований
2.2. Бактериологические методы исследований
2.3. Методы изучения факторов вирулентности энтеробактерий
2.4. Методы статистической обработки результатов исследований
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Этиологическая структура болезней органов пищеварения птиц,
вызываемых патогенными энтеробактериями
3.2. Результаты изучения факторов вирулентности энтеробактерий,
выделенных из репрезентативной выборки птицеводческих объектов..
3.2.1. Результаты изучения адгезивных, инвазивных
свойств и устойчивости к фагоцитозу
3.2.2. Результаты изучения токсигенных свойств
3.2.3 Результаты изучения фенотипических признаков энтеробактерий,
связанных с плазмидами вирулентности
3.3 Результаты исследования дифференциально-диагностических признаков
патогенных энтеробактерий при диссеминации в ткани и органы

3.4. Результаты изучения влияния токсигенных энтеробактерий на динамику
развития патологических процессов в тканях и органах птиц
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. При содержании на ограниченных площадях, искусственный микроклимат, поточная система выращивания птицы обусловливают развитие и распространение инфекционных болезней, в том числе, вызываемых патогенными энтеробактериями (Бессарабов Б.Ф., 1980; Стрельников А.П., 1987; Тугаринов O.A., 1987; Шустер Б.Ю., 1987; Каврук JI.C., 1994; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Ленев С.В., 1996; Смирнова Л.И., 1996; Капустин A.B., 2001; Вершняк Т.В., 2003; Артемьева Т.Н., 2004; Салаутин В.В., 2004; Степаненко И.П., 2005; Крупальник В.Л., 2005; Коровин В.И., 2005; Хатько Н.Ф., 2005; Гусев В.В., 2006; Бедоева З.М., 2006; Павлова И.Б. и соавт., 2007; Субботин В.В., 2007; Панасенко A.C., 2008; Рождественская Т.Н., 2011; Кононенко А.Б. и соавт., 2011; Маннапова Р.Т., 2012; Пименов Н.В., 2012; Костенко Ю.Г. и соавт., 2012; Алиев А.С., Алиева А.К., 2013; Ирза В.Н., 2014; Панин А.Н., Куликовский A.B., 2014; Collins M.D., 2001; Krysta H.R., 2006). В структуре инфекционных болезней птиц в 2012 г. заболеваемость эшерихиозом составила 53,9 %, падеж - 92,0 %; в 2013 г. массовая доля сальмонеллеза — 12,0 %, эшерихиоза- 40,0 % (Венгеренко Л.А., 2012; Фисинин В. И., 2013; Бобылева Г.А., 2013; Джавадов Э.Д., 2014). При персистенции микроорганизмов в организме бактерионосителей может происходить контаминация пищевого сырья энтеробактериями, в том числе E.coli 0157:Н7, циркулирующими в птицеводческих хозяйствах и выделенных из мяса бройлеров (Бондаренко В.М., Шаманова М.А., 2004; Степаншин Ю.Г. и соавт., 2005; Doule М.О., Schoeni J.L., 1987; Bitzan М., Ludwig K., 1993; Thamm В., 2000). Распространенность энтерогеморрагических штаммов среди поголовья кур и индеек составила 9,3 % из общего числа изолятов (Онищенко И.С., 2008). При изучении видового состава изолятов, циркулирующих среди поголовья птицы, наряду с сальмонеллами и патогенными эшерихиями, выделены бактерии K.pneumonia, P.vulgaris, Y.pseudotuberculosis, C.jejuni, P.aeruginosa (Куликовский A.B., 1998;

Ленченко Е.М., 2000, 2014; Борисенкова А.Н., 2008; Вашин И., Стоянчев Т., 2008; Шуляк Б.Ф., 2008; Ольховик О.П., 2009; Скляров О.Д. и соавт., 2010; Козак С.С., 2014; Зикитагап Я.К., 2003; ¥ез1еппагк Ьт^—202>). При инфицировании восприимчивых видов реализация патогенных свойств энтеробактерий обеспечивается факторами вирулентности, кодируемыми хромосомными, плазмидными генами и интегрированными в хромосому бактериофагами (Светоч Э.А., 1992; Молофеева Н.И., 2004; Орлова К.А., 2004; Пирожков М.К., 2002, 2011; ЬеШгоу А. V, 2010; Goodridge Ь.В., 2011; Sulakvelidze А., 2011; Равшаня Р., 2012; Вещкаш /?.£)., 2013). Для оптимизации схемы
бактериологической диагностики, характеризующейся трудоемкостью, продолжительностью, ретроспективностью идентификации и дифференциации эпизоотических штаммов, целесообразно изучение этиологической значимости факторов вирулентности в патогенезе и иммуногенезе инфекционного процесса при диссеминации микроорганизмов в тканях и органах птиц, что и определило актуальность темы диссертационной работы.
Цель работы: изучить видовой состав и патогенные свойства изолятов, выделенных из репрезентативной выборки птицеводческих объектов, динамику развития патологических процессов при диссеминации в ткани и органы птиц для совершенствования индикации факторов вирулентности энтеробактерий и дифференциальной диагностики эшерихиоза птиц
Задачи исследований:
- изучить этиологическую структуру болезней органов пищеварения птиц, вызываемых патогенными энтеробактериями;
- изучить факторы вирулентности и фенотипические признаки, связанные с плазмидами вирулентности энтеробактерий, выделенных из репрезентативной выборки птицеводческих объектов;
- апробировать и изыскать эффективные дифференциально-диагностические среды, лабораторные модели, молекулярно-генетические экспресс-методы идентификации ДНК патогенных бактерий;

прежде всего, через инвазию в слизистую оболочку (Ленченко Е.М., 2000; Westermark L., 2013). Энтеротоксигенные Escherichia coli не являются инвазивными, но токсины энтерогеморрагических штаммов Escherichia coli являются цитотоксичными и непосредственно вызывают повреждение слизистой оболочки кишечника. Так, вероцитотоксины Escherichia coli, не влияют на электролитный баланс в энтероцитах, в результате взаимодействия с 60 S рибосомальной субъединицей, обладая N-гликозидазной активностью, отщепляют аденин от 28 S - рРНК, блокируя синтез белка (Коткова Н.В., 2007; Поздеев O.K., 2007).
На основании анализа данных литературы сделано заключение, что функционирование факторов патогенности имеет общие закономерности, связанные со способностью к опознаванию специальных рецептов, взаимодействию и как следствие, проявлению адгезивных свойств, колонизации эпителия, затем нарушению функций иммунной системы, диссеминации возбудителей в ткани и органы, развитию инфекционноаллергических реакций, длительной персистенции возбудителей в организме.
Учитывая, биологию микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, методы обнаружения бактерий построены по общему принципу: посев исследуемого материала на плотные дифференциально-диагностические среды для выделения энтеробактерий (Эндо, Левина), для выделения и дифференциации сальмонелл (Плоскирева, Висмут-сульфит агар), кроме того, для выделения сальмонелл из feces, неразведенные пробы засевают в среды обогащения (селенитовый бульон, магниевую или Мюллера). Грамотрицательные культуры микроорганизмов пересевают в пробирки со скошенным мясопептонным агаром, для дальнейшего изучения ферментативных, антигенных и патогенных свойств. Диагноз считают установленным в случае, если выделены чистые культуры энтеробактерий не менее чем из двух органов и тканей: селезенки, крови сердца, костного мозга, головного мозга без изучения патогенных свойств и серогрупповой принадлежности штаммов. В остальных случаях устанавливают патогенность