Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота и особенности проявления болезни в современных условиях ведения животноводства

• Автор: Строганова, Ирина Яковлевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 330 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота

1.1.1. Историческая справка

1.1.2. Характеристика возбудителя

1.1.3. Структура и функционирование генома вируса

1.1.4. Антигенные и генетические подгруппы вируса

1.1.5. Репликация вируса

1.2. Культуральные свойства респираторно-синцитиального вируса

1.2.1. Культивирование РС-вируса в различных клеточных системах
1.2.2. Условия и методы культивирования. Питательные среды, сыворотки, добавки
1.2.3. Цитопато генное действие вируса
1.3. Эпизоотологические данные. Особенности проявления респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота в молочных хозяйствах
1.4. Особенности патогенеза, клинических признаков и патоморфологических изменений при респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота
1.4.1. Патогенез болезни
1.4.2. Клинические признаки
1.4.3. Патоморфологические изменения при респираторносинцитиальной инфекции крупного рогатого скота
1.5. Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота
1.5.1. Выделение вируса в культурах клеток
1.5.2. Выявление антигена вируса

1.5.3. Разработка и применение полимеразной цепной реакции для диагностики РСИ КРС
1.5.4. Серологическая диагностика болезни
1.6. Характеристика инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
1.6.1. Особенности течения инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в молочных стадах
1.7. Характеристика вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота
1.7.1. Особенности течения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в молочных стадах
1.8. Респираторные болезни крупного рогатого скота, протекающие с участием вирусов и условно-патогенных бактерий
1.9. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Параметры выделение респираторно-синцитиального вируса в культурах клеток
2.2.2. Изучение спектра чувствительности различных культур клеток к штамму РС-Б респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота
2.2.2.1. Чувствительность органной и первичных культур клеток к штамму РС-Б
2.2.2.2. Изучение индивидуальной чувствительности первично-трипсинизированных культур клеток
2.2.2.3. Чувствительность диплоидных культур клеток к штамму

2.2.2.4. Чувствительность перевиваемых клеточных линий к штамму

2.2.2.5. Спектр чувствительных культур клеток к штаммам респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота
2.2.3. Оптимизация параметров культивирования вируса в чувствительных клеточных системах
2.2.3.1. Адаптация штамма РС-Б в культурах клеток
2.2.4. Методы контроля размножения и определения инфекционной активности РС-вируса крупного рогатого скота в культурах клеток
2.2.4.1. Определение инфекционной активности вируса по БОЕ и ФОБ..
2.2.4.2. Электронная микроскопия
2.2.4.3. Цитоморфологические исследования
2.2.4.4. Эффективность различных методов индикации вируса в инфицированных культурах клеток
2.2.5. Параметры хранения вируссодержащей суспензии в лабораторных условиях
2.2.5.1. Инфекционная активность штаммов РС-Б и К-18 респираторносинцитиального вируса крупного рогатого скота в процессе хранения
2.2.5.2. Влияние сроков хранения при различных температурных режимах на пригодность РНК-вируса к исследованию в ОТ-ПЦР
2.2.6. Использование культурального респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота с диагностической целью
2.2.6.1. Разработка эритроцитарного диагностикума для серологической диагностики респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота, овец и коз методом РНГА
2.2.6.2. Использование штамма РС-Б РС-вируса крупного рогатого
скота для получения целлюлозных диагностикумов
2.2.6.3. Получение специфических гипериммунных сывороток к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота
2.2.7. Распространение РСИ КРС в хозяйствах Российской Федерации

Для выделения PC-вируса человека зарубежные авторы, в основном, используют «минимальную» среду Игла МЕМ с 2 - 5% сыворотки кур или крупного рогатого скота, имеющей pH на уровне 7,5-7,6 (Н.П. Лещинская, JT.E. Камфорин, 1986). Для выделения и размножения респираторно -синцитиального вируса крупного рогатого скота используют культуры клеток, выращиваемые на обогащенных питательных средах сложного состава. Часто применяют среды Игла и Игла MEM (M.F. Paccaud, A. Jacquer, 1970; L.H. Thomas et al., 1976; C.R. Rossi et al., 1978; H.T. Martin, 1983; M.S. Me Nulty et al., 1983; K.G. Gillete, P.S. Smith, 1985; J.F. Wermann et al., 1985) с обязательным добавлением глютамина, который стимулирует формирование синцитиев вируса (Н.П. Лещинская, Л.Е. Камфорин, 1986). Отсутствие глютамина в поддерживающей среде приводит к резкому угнетению репликации вируса (M.S. Shahrahadi, W.K. Lee Patrick, 1988). Реже используют среды 199, раствор Хенкса и 199 (1:1), обычно применяемые для выращивания первичных культур клеток (G. Charlier et al., 1984; P. Бостанджиева и соавт., 1984). Для обогащения сред используют: 0,25 - 0,5% лактальбумина, 0,06-0,1% дрожжевого экстракта (М. Matumoto et al., 1974 ; D.W. Kingsbury, 1990), 0,5% натрия глюконата, 1% глюкозы, 5% триптозофосфата (М. Matumoto et al., 1974), 0,09% альбумина плазмы
крупного рогатого скота, 5% мясного фосфата триптозы, N-2 (HePES) буфер. pH среды, которая должна быть не ниже 7,4, поддерживается I N NaOH или 5% раствором бикарбоната натрия (L.H. Thomas et al., 1976; Н.П. Лещинская, Л.Е. Камфорин, 1986 ).
Весьма существенной составной частью любой поддерживающей среды является сыворотка - источник белковых компонентов. Во всех сообщениях для культивирования PC-вируса используют сыворотку разных животных. Группа авторов (Н.П. Лещинская, Л.Е. Камфорин, 1986) обращала внимание на важность поддержания культур, инфицированных РС-вирусом человека, в присутствия 2 - 5% сыворотки и рекомендует использовать