Биологические свойства штаммов вируса гриппа H5N1-субтипа, выделенных от диких и домашних птиц в различных регионах России

• Автор: Шаршов, Кирилл Александрович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 160 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список используемых сокращений

ВВЕДЕНИЕ ' ~ Г

ГЛАВА ГОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ " _ ~" ~~ "_J _ "

L ДЗируп гриппа А

1.1 Общеестроение вириона

1.2 Геном вируса гриппа А и вирусные белки '

2. _ Экология вируса гриппа А. Естественный резервуар в природе

2.1 Дикие птицы как природный резервуар LPAI-вирусов

2.1.1 Вирус 1риппа у уток

2.1.2 Вирус гриппа у_чаек
2.1.3 Вирус гриппа у других птиц
2.L4 Гснетическое разнообразие вируса гриппа у диких птиц
3. Высокопатогенные варианты вируса гриппа A (HPAI)
3.1 Азиатский вариант вируса гриппа H5N1 -субтипа
3.2 Механизмы распространения HPAI
4. Заключение по обзору литературы
ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1 Анализ эпизоотической ситуации по гриппу птиц H5N1 -субтипа в
России (2005-2009 гг.). Результаты вирусологического
исследования биоматериала от диких, домашних и синантропных
птиц __ __ __
2.2.2 Биологические свойства штаммов вируса гриппа H5N1 -субтипа,
выделенных от диких и домашних птиц в России (2005-2009 гг.)
2.2.2.1 Культивирование в системе развивающихся куриных эмбрионов
2.2.2.2 Патогенность для кур
2.2.2.3 Патогенность для белых мышей
2.2.2.4 Молекулярно-биологический и филогенетический анализ генов
НА и NA штаммов вируса гриппа H5N1-субтипа, выделенных в России от диких и домашних птиц (2005-2009 гг.)
2.2.3 Создашюоллекции штаммов_вируса гриппа H5N1 -субтипа
2.2.4 Изучение штамма A/common gull/Chany/P/2006 с позиции
возможности создания на его основе диагностических препаратов
2.2.4.1 Молекулярно-биологический и филогенетический анализ штамма

2.2.4.2 Изучение антигенных и репродуктивных свойств штамма
A/common gull/Chany/2006, и возможности создания на его основе диагностических препаратов
ГЛАВА 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
вывода
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ‘
ПРИЛОЖЕНИЕ ’

Список использованных сокращений
ВГА - вирус гриппа А
РНК - рибонуклеиновая кислота
ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота
РВ1 - полимеразный белок
РВ2 - полимеразный белок
РА - полимеразный белок
НА - гемагглютинин
NA - нейраминидаза
NP - нуклеопротеин
М - матричный белок
NS - неструктурный белок
LPAI-вирусы (low pathogenic avian influenza) - низкопатогенный вирус гриппа А
HP AI-вирусы (highly pathogenic avian influenza) - высокопатогенный вирус гриппа А
EID5o - 50% эмбриональная инфицирующая доза
LD50 - 50% летальная доза
ОТ - обратная транскрипция
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РГА - реакция гемагглютинации
РТГА - реакция торможения гемагглютинации
РКЭ - развивающиеся куриные эмбрионы
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ГАЕ - гемагглютинирующая единица
УФ - ультрафиолетовое излучение
IVPI (Intra venous pathogenity index) - индекс патогенности при внутривенном введении

ВВЕДЕНИЕ
Грипп - заболевание, привлекающее огромный интерес большого числа специалистов не только в области современной медицины и вирусологии, но и достаточно широкого круга сфер деятельности человека (экономики, здравоохранения, сельского хозяйства, охраны окружающей среды и т.д.). Эта инфекция, известная уже около 400 лет, вызывается вирусом, обладающим достаточно высоким потенциалом антигенной изменчивости. В последние годы стало очевидным, что степень вариабельности вируса гриппа типа А так велика, что он с легкостью преодолевает иммунный барьер против ранее циркулировавших штаммов. За последние годы были получены важные результаты в области понимания структуры, репликации и иммунологии вируса гриппа А (ВГА) с помощью постоянно совершенствующихся методов, а также внедрения новых подходов. Результатом явился значительный прогресс в улучшении эпидемиологического и эпизоотического надзора, разработка новых средств профилактики и методов защиты от инфекции.
Длительное существование вируса гриппа А в ареале обитания его естественных хозяев (в основном, птиц) привело к устойчивости системы вирус-хозяин в биосфере (Д.К.Львов с соавт., 2004; 11.0.’97'еЬз1ег е! а1., 1992). Между тем, в процессе эволюции периодически возникают новые высокопатогенные для человека и животных варианты. Это, в свою очередь, ставит мировое сообщество перед угрозой новой пандемии, приносит серьезный экономический урон в сельском хозяйстве, создает проблемы в области охраны биологических ресурсов планеты. Подтверждением этому служат документированные случаи инфицирования человека и домашних животных высокопатогенными вирусами гриппа Н9И2, Н7Ш, Н5Ш-субтипов (Т. Нопто1о, У. Каггаока, 2005).
Среди данных субтипов Н5№ считается наиболее вероятным прародителем новой пандемии гриппа из-за высокой летальности,

вариант стал доминирующим повсеместно в Юго-Восточной Азии, включая Вьетнам, Таиланд, Индонезию, Камбоджу, Лаос, Корею, Японию, Китай и Малайзию (I.Capua, D.J.Alexander, 2008; D.J.Alexander, I.II.Brown, 2009). В дальнейшем, продолжая эволюционировать, этот вариант H5N1 дал начало новым генетическим ветвям. Так, показано, что вирус гриппа H5N1, который вызвал эпизоотии среди домашних птиц в Японии и Корее, генетически отличен от всех остальных (K.S.Li et al., 2004; M.Mase et al., 2005). Филогенетический анализ более поздних штаммов высокопатогеиного вируса гриппа птиц H5N1 показал, что штаммы, изолированные во Вьетнаме и Таиланде, сформировали группу, которая оказалась отличной от индонезийской группы.
Несмотря на генетические отличия вируса H5N1, выделенного в различных регионах, разные варианты этого вируса оставались высокопатогенными для домашних птиц и вызывали летальные случаи инфекции у человека. До настоящего времени более 140 млн. домашних птиц в мире погибло от HPAI H5N1 или было уничтожено как потенциально инфицированных им (OIE, 2009; Alexander & Brown, 2009). По официальной информации Всемирной Организации Здравоохранения, на 30 декабря 2009 г. было документировано 467 случаев инфицирования людей, из которых 282 окончились летальным исходом (WHO, 2009).
В 2008 г. три крупнейшие международные организации (ВОЗ (WHO), Организация здоровья животных (OIE) и Организация по сельскому хозяйству и продовольствию ООН (FAO)) опубликовали универсальную систему классификации вируса гриппа Н5Ш-субтипа, созданную на основе филогенетического анализа гена НА. Согласно этой системе выделяют несколько групп - клад и субклад, имеющих происхождение от единого предка. Выделено 10 клад (0-9 clades), представители которых преимущественно распространены в конкретных географических регионах. Классификация основана на топологии филогенетического древа известных