Оптимизация метода ВЭЖХ для терапевтического лекарственного мониторинга противосудорожных препаратов, метотрексата и циклоспорина А

• Автор: Федорова, Галина Афанасьевна
• Шифр специальности: 05.11.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Введение
2.2. Неподвижные фазы
2.3. Хроматографические колонки
2.4. Подвижные фазы
2.5. Детектирование лекарственных веществ в ОФ ВЭЖХ !
2.6. Подготовка пробы
2.7. Валидация биоаналитических методов
2.8. Заключение
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Оборудование
3.2. Материалы
3.3. Методы
3.3.1. Условия хроматографического определения ЛВ
3.3.2. Отбор и хранение проб крови
3.3.3. Удаление липидов из сыворотки крови
3.3.4. Удаление белков из сыворотки крови
3.3.5. Подготовка пробы сыворотки крови для определения гексамидина, фенобарбитала, бензонала, ламиктала,
дифенина, карбамазепина и метотрексата
3.3.6. Подготовка пробы для определения этосуксимида
3.3.7. Подготовка пробы для.определения вальпроевой кислоты
3.3.8. Подготовка пробы для определения клоназепама
3.3.9. Подготовка пробы для определения циклоспорина А
3.3.10. Оценка степени извлечения из сыворотки крови клоназепама и циклоспорина А
3.3.11. Определение градуировочных зависимостей для ЛВ
3.3.12. Оценка селективности и специфичности методик анализа
3.3.13. Оценка метрологических характеристик методик анализа
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Выбор масштаба ВЭЖХ
4.2. Выбор неподвижной фазы
4.3. Выбор подвижной фазы
4.4. Выбор условий хроматографического определения
4.4.1. Выбор длин волн детектирования

4.4.2. Элюенты и режим элюирования
4.4.3. Выбор температуры колонки
4.5. Подготовка пробы
4.5.1. Удаление липидов
4.5.2. Осаждение белков
4.5.3. Подготовка пробы для определения этосуксимида
4.5.4. Подготовка пробы для определения клоназепама
4.5.5. Подготовка пробы для определения циклоспорина А
4.5.6. Подготовка пробы для определения вальпроевой кислоты
4.6. Определение ПСП в сыворотке крови
4.7. Определение циклоспорина А в сыворотке крови
4.8. Определение метотрексата в сыворотке крови
4.9. Метрологические характеристики разработанных методик
4.9.1. Предел обнаружения, предел количественного определения
и линейный диапазон
4.9.2. Оценивание характеристики воспроизводимости
4.9.3. Оценивание правильности
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Приложение 1. Структурные формулы ЛВ, подлежащих
мониторингу в РФ
Приложение 2. Структурные формулы ЛВ, рекомендованных
для мониторинга в США
Приложение 3. Гексамидин, Вальпроевая кислота, Дифенин,
Карбамазепин, Клоназепам, Ламиктал, Фенобарбитал,
Этосуксимид, Метотрексат, Циклоспорин А
Приложение 4. Результаты определения противосудорожных препаратов в сыворотке крови пациентов
Депакин (вальпроевая кислота)
Карбамазепин
Фенобарбитал и бензонал
Комплексная тер апия
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Здравоохранение - одна из главных областей человеческой деятельности, успехи которой прямо и косвенно зависят как от уровня развития аналитической химии в общем, так и от степени внедрения наиболее передовых методов химического анализа в практику. К таким методам относится и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая за последние 30 лет во многом определила заметный прогресс в практической медицине. Важнейшим приложением ВЭЖХ стал терапевтический лекарственный мониторинг, позволяющий оптимизировать индивидуальную дозировку лекарств, которая необходима для предотвращения побочных эффектов и повышения эффективности лечения.
ВЭЖХ как высокочувствительный и универсальный метод анализа, которому во многих случаях нет альтернативы, позволяет одновременно следить за изменением концентрации несколько лекарственных веществ (ЛВ), отличается достаточной точностью и воспроизводимостью. Однако, активное использование ВЭЖХ в повседневной (рутинной) клинической практике ограничено из-за отсутствия унифицированных методик анализа. В настоящее время для определения какого-либо ЛВ применяются своя "уникальная" процедура подготовки пробы и своя методика ВЭЖХ-анализа, которые в каждом конкретном случае предписывают использование разных колонок, разных элюентов и разных детекторов. Очевидно, что эти обстоятельства приводят к необходимости каждый раз изменять хроматографическую систему и калибровать хроматограф, что, в конечном итоге, значительно увеличивает продолжительность всего анализа, требуют высокой квалификации персонала и, наконец, существенно повышают стоимость анализа.
Один из возможных путей решения этой проблемы — разработка максимально унифицированных, экономичных и экспрессных методик подготовки пробы и хроматографических процедур. Реализация такого подхода, очевидно, позволит снизить расходы на проведение анализа и широко внедрить ВЭЖХ в практику лекарственного мониторинга.
контрольные (стандартные) образцы, приготовленные во всем интервале определяемых концентраций. Отклонение от номинального значения по меньшей мере четырех из каждых шести контрольных образцов не должно превышать 15%. Документация должна соответствовать установленным требованиям и должна быть доступна для аудита и инспекций.
В Российской Федерации валидация аналитических методов для контроля качества лекарственных средств принята для фармацевтических предприятий и нормативно закреплена в ОСТ 42-510-98 [89]. Нормативных документов, касающихся валидации аналитических методов, применяемых в клинической практике, нам найти не удалось. В соответствии с Приказом М3 РФ №45 от 7.02.2000 г. контроль качества аналитических методик должен проводиться путем оценки сходимости при проведении 10-20 параллельных определений, и он распространяется только на определение биохимических показателей крови и мочи