Морфогенез кожи и волосяных фолликулов мутантных мышей we/we wal/wal с постнатальной алопецией

• Автор: Риппа, Александра Леонидовна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 143 с. : ил.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика структуры волосяного фолликула
1.2. Формирование эпидермиса
1.3. Морфогенез волосяного фолликула
1.4. Стадии формирования волосяного фолликула
1.5. Ориентация волосяных фолликулов вдоль передне-задней оси
1.6. Типы волосяных фолликулов в шерстном покрове мыши
1.7. Регуляция морфогенеза волосяного фолликула
1.7.1. Индукция закладки волосяных фолликулов
1.7.2. Образование и стабилизация такоды
1.7.3. Образование дермалъного компонента волосяных фолликулов
1.7.4. Пролиферация кератииоцитов и рост волосяных фолликулов
1.7.5. Дифференциация кератиноцитов волосяных фолликулов
1.8. Стволовые клетки волосяного фолликула
1.9. Эпидермальная базальная мембрана
1.10. Апико-базальная асимметрия базальных кератиноцитов
1.11. Интегрины в формировании и гомеостазе эпидермиса и волосяных фолликулов
1.12. Наследственные патологии волос и их модели у лабораторных животных
1.13. Мутантные мыши we/we wal/wal
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
И. 1. МАТЕРИАЛЫ
II. 1.1. Лабораторные животные
II. 1.2. Лабораторное оборудование
11.1.3. Химические реактивы
II.2. МЕТОДЫ

П.2.1. Определение типов волос
11.2.2. Датирование беременности у мыши
II.2.3.Забор материала
11.2.4. Криоблоки
11.2.5. Иммуногистохимическое исследование
11.2.6. Выявление активности щелочной фосфатазы
II. 2.7. Гистологическое исследование
11.2.8. Тотальный препарат эмбрионального эпидермиса
11.2.9. Фиксация тотального эпидермиса для световой микроскопии
11.2.10. Тотальный препарат постпаталыюго эпидермиса хвоста
IL2.ll. Выделение культуры первичных эмбриональных кератиноцшповмыши
11.2.12. Культивирование первичных эмбриональных базальных кератиноцшпов

11.2.13. Индукция дифференциации кератиноцшпов в культуре
11.2.14. Проточная цитофлуориметрия
11.2.15. Выявление метки BrdU в культуре кератиноцшпов
11.2.16. Инъекция BrdU новорожденным мышам и выявление метки в тотальном препарате эпидермиса
11.2.17. Модель заживления кожной раны
11.2.18. Индукция стадии роста волосяных фолликулов с помощью депиляции
11.2.19. Статистическая обработка результатов
III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
111.1. Фенотип шерстного покрова постнатальных мышей we/we wal/wal
III. 1.1. Общая характеристика шерстного покрова
III. 1.2. Структура стержней волос
111.2. Стволовые клетки волосяных фолликулов мышей we/we wal/wal
Ш.2.1. Выявление стволовых клеток волосяных фолликулов, длительно сохраняющих метку ДНК
111.2.2. Экспрессия кератина 15, маркера стволовых клеток волосяных фолликулов
111.3. Регенерация кожи и волосяных фолликулов мышей we/we wal/wal
111.3.1. Индукция роста волосяных фолликулов
III. 3.2. Заживление кожной раны у взрослых особей we/we wal/wal
111.4. Паттерн распределения и параметры волосяных фолликулов в эмбриональном эпидермисе мышей we/we wal/wal на El 8.
III. 4.1. Количество зачатков волосяных фолликулов и плотность их распределения
111.4.2. Параметры волосяных фолликулов: высота и ширина в основании

111.5. Формирование эпителиального и мезенхимного компонента волосяных фолликулов эмбрионов Е18.5 мышей we/we wal/wal
III. 5.1. Утолщения базального слоя у эмбрионов we/we wal/wal
III.5.2.........................................................................Утолщения базального слоя — аномальные плакоды мутантных волосяных фолликулов
III. 5.3. Реализация сигнального пути WNT в деформированных мутантных зачатках волосяных фолликулов
III.5.4.........................................................................Характер образования дермалъного компонента мутантных волосяных фолликулов
111.6. Дифференциация эпидермиса эмбрионов Е18.5 мышей we/we wal/wal
III. 6.1. Пролиферация супрабазальных кератиноцитов we/we wal/wal
III. 6.2. Аномалии базальной мембраны эмбриональной кожи мутантов
III. 6.3. Стратификация и ороговение эмбрионального эпидермиса we/we wal/wal
111.7. Пролиферация и дифференциация эмбриональных кератиноцитов
мышей we/we wal/wal в условиях in vitro
III. 7.1. Пролиферация в культуре первичных кератиноцитов
III. 7.2. Доля клеток в фазе S клеточного цикла
III. 7.3. Распределение кератиноцитов по фазам клеточного цикла
III. 7.4. Индукция дифференциации культуры первичных кератиноцитов
111.8. Образование клеток-предшественников стержня волоса у эмбрионов Е18.5 мышей
we/we wal/wal
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

демонстрируют, что LIIX2 играет роль в сохранении ниши, свойств СК и регулирует активность СК в коже в ответ на повреждение.
Транскрипционный фактор SOX9 на ранней стадии морфогенеза ВФ экспрессируется в супрабазальных клетках плакод. По мере роста ВФ компартмент SOX9+ клеток локализуется в зоне, где в дальнейшем формируется БЖ, и играет важную роль в спецификации СК ВФ. При удалении Sox9 в коже у нокаутных мышей блокируется морфогенез сальных желез, не формируется БЖ, что приводит к недоразвитию стержня волоса и ослаблению ранозаживления (Nowak et al.,2008).
Точная идентификация местоположения СК ВФ in vivo является важной проблемой биологии кожи, поскольку: 1) не определено четкое место локализации СК с момента закладки ВФ и до его морфологических преобразований в цикле регенерации; 2) нет универсального маркера СК ВФ. Известно, что эпителиальные СК обладают свойствами самообновления, мультипотентности и клоногенности подобно гематопоэтической системе. Однако, состояние покоя, как полагают, основная отличительная характеристика эпителиальных СК. В этом ключе подходящим маркером СК ВФ может быть длительное сохранение метки ДНК (Terskikh et al., 2012).
1.9. ЭПИДЕРМАЛЬНАЯ БАЗАЛЬНАЯ МЕМБРАНА
Важнейшим признаком эпителия является расположение его клеток в виде пласта на БМ. Эпидермальная БМ является одной из самых хорошо изученных структур. В эпидермисе только базальные кератиноциты имеют контакт с БМ, куда они синтезируют ВКМ. Дерма содержит разные типы клеток, которые окружены ВКМ, преимущество составляют фибробласты. Эластичность дерме придают такие белки ВКМ, как фибриллы коллагена I и III типов, микрофибриллы и эластические волокна. Оба компартмента кожи участвуют в формировании сложной, высокоспециапизированной структуры матрикса — БМ. В одиночку ни кератиноциты эпидермиса, ни фибробласты дермы не способны образовать структуру БМ. Только совместный вклад синтезируемых компонентов ВКМ этими компартменгами кожи приводит к формированию полноценной БМ (Marinkovich et al., 1993; El Ghalbzouri et al., 2005). Она одновременно является связующим и разделяющим слоем для этих двух тканей. Поскольку в эпидермис не проникают кровеносные сосуды, транспорт питательных веществ обеспечивает БМ, выполняя роль двустороннего избирательного фильтра (Breitkreutz et al., 2009). С помощью электронной микроскопии было показано, что БМ состоит из электронно-плотного слоя, темной пластинки (lamina densa) размером 50 нм; электронно-прозрачного слоя, называемого