Клиническая и морфофункциональная характеристика репарации тканей гнойных ран в аспекте нейроэндокринной регуляции при лечении милиацилом

• Автор: Прудников, Александр Владимирович
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 102 с. : 23 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 .СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МЯГКИХ ТКАНЕЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Лечение гнойных ран

1.2. Регуляция регенерации тканей гнойных ран

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. РЕГЕНЕРАЦИЯ ГНОЙНЫХ РАН ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ЛЕЧЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ
3.1. Сравнительная морфофункциональная оценка регенерации гнойных ран под влиянием различных способов местного лечения

3.2.Иммуноцитохимическая идентификация экспрессии

проапоптотических белков р53, саьраэе-З, антиапоптотического белка Ьс1-2, а также белка К1-67 - маркера пролиферации у клеток на поле воспаления, как критерий оценки характера течения и прогнозирования репаративных процессов в гнойных ран

3.3. Сопоставительный анализ лечебного воздействия милиацила на

заживление гнойных ран
ГЛАВА 4. ОЦЕНКА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НОНАПЕПТИДЕРГИЧЕСКОЙ ГИПОТАЛАМО-ГИПОФИЗАРНОЙ НЕЙРОСЕКРЕТОРНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ГНОЙНЫХ РАНАХ, ВЫЗВАННЫХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ БАКТЕРИАЛЬНЫМИ ПАТОГЕНАМИ С РАЗЛИЧНЫМИ ПЕРСИСТЕНТНЫМИ
СВОЙСТВАМИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ЛЕЧЕНИЯ
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность исследования
Лечение гнойно-воспалительных процессов мягких тканей является одной из важнейших проблем хирургии (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1981; Глянцев С.П., Павлов В.В., 1998; Белоконев В.И., Измайлов Е.П., 2009; Оболенский В.Н., 2013). Постоянное внимание к этой проблеме объясняется увеличением гнойно-воспалительных заболеваний, тяжестью их течения, прогрессирующим возрастанием антибиотикоустойчивых и антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов (Стручков В.И., 1987; Бубнова H.A. с соавт., 1989; Светухин А.М. с соавт., 2003; Митиш В.А. с соавт., 2012; Нузов Б.Г. с соавт., 2012; KezteszI. et al., 1983; Koseoglu H., 2006). Среди всех хирургических больных раневая инфекция встречается у 35 - 45% (Блатун Л.А., 2011).
Успех лечения больных с гнойной хирургической инфекцией во многом зависит от местного лечения (Егоров В.А., 2001; Бордуновский
В.Н. с соавт., 2004; Ефименко Н. А. с соавт., 2004; Conley J., 2003). Применяемый в настоящее время большой арсенал методов и средств не всегда обеспечивает желаемый результат. Поэтому важен поиск новых методов и средств местного лечения, обладающих разносторонним воздействием, обеспечивающим антимикробный, противовоспалительный и репаративный эффект.
Таким требованиям обладает разработанный в ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации препарат милиацил - просяное масло (Miliacylum).
Решением номенклатурной комиссии ФГК М3 и МП от 19 июля 1995 г. препарату утверждено название милиацил. Приказом Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации

№ 292 от 27 октября 1995 г. данный лекарственный препарат разрешен для медицинского применения и промышленного выпуска. Милиацил внесен в реестр зарегистрированных лекарственных средств - номер регистрационного удостоверения 95/292/7 от 27.10.1995 г.
Работами Л.Е. Олифсона с соавт. (1989), Б.Г. Нузова (1991), Б.Г. Нузова, A.A. Стадникова (1994) установлено, что лечебный эффект милиацила обусловлен наличием в нем ряда биологически активных соединений.
Однако не до конца изучены изменения в тканях гнойных ран при использовании милиацила в аспектах ультраструктурного и молекулярно-генетического анализа (апоптоз).
Одной из причин неблагоприятного течения инфекционных заболеваний считается инфицирование возбудителем, способным секретировать биологически активные вещества, инактивирующие защитные механизмы хозяина и оцениваемые, как факторы бактериальной персистенции (Бухарин О.В., 1999; Курлаев П.П., :2001).
Антилактоферриновая активность микроорганизмов является фактором персистенции бактерий, способствующим выживанию в организме хозяина (Валышева И.В., 2005). Многие патогенные бактерии обладают
механизмами, направленными на управление клеточной гибелью, что позволяет им поддерживать оптимальные условия развития инфекции (Зигангирова Н. А. с соавт., 2004).
В последние годы значительно повысился интерес исследователей к изучению роли и значения нонапептидов супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса в обеспечении процессов адаптации и компенсации нарушенных функций организма.
Динамика изменения состояния нервных клеток демонстрирует связь со стадиями раневого процесса и его длительностью (Алексеева Н.Т. с соавт., 2011). Установлено, что рассинхронизация фаз секреторного цикла клеточных элементов крупноклеточных ядер гипоталамуса у

реактивом Шиффа по Мак Манусу. Гистохимические реакции сопровождались энзиматическими контролями (Пирс Э., 1962).
Для электронной микроскопии материал фиксировали в охлажденном 2,5% растворе глутарового альдегида на S-коллединовом буфере (pH—7,3 два часа при комнатной температуре) по методике М.A. Hayat (1989). Постфиксацию проводили в четырехоксиде осмия (MillonigG.,1961). Затем объекты дегидратировали в ацетоне с возрастающей концентрацией (от 50° С до 100° С) и заключали в смолу ЭПОН-812 по прописи Б.Уикли (1975). Ультратонкие срезы, изготовленные на ультратоме LKB-5, подвергали двойному контрастированию в 5% спиртовом растворе уранил-ацетата и цитрате свинца (Reynolds E.S., 1963). В последующем срезы изучали и фотографировали в электронном микроскопе ЭВМ 100 АК при увеличениях от х 12000 до 50000.
Морфометрические исследования проводили при помощи винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15хУ4.2 и окулярной вставки
Г.Г. Автандилова (1990) с последующей статистической обработкой количественных параметров.
Для идентификации клеток с признаками апоптоза (программированной гибели клеток) в регенерате гнойных ран использовали иммуноцитохимические реакции. Для определения экспрессии проапоптотического белка р53, антиапоптотического белка bcl-2, а также белка Ki-67, серийные гистосрезы (толщиной 5-6 мкм) инкубировали с соответствующими моноклональными антителами (фирма «Dako», Дания) в рабочем разведении 1:50. Для определения экспрессии проапоптотического белка caspase-3 («Sigma-Aldrich», США) использовали рабочее разведение 1:100. Для визуализации структур использовали стрептавидин-биотиновый пероксидазный метод (Dako LSAB-kit, Дания) с дополнительным окрашиванием ядер клеток