Коилин-содержащие тельца в ядрах растущих ооцитов голубя сизого (Columba livia)

• Автор: Ходюченко, Татьяна Александровна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 140 с. : ил.

Оглавление
Введение

1. Обзор литературы

1.1. Внутриядерные домены

1.1.1. Компартментализация внутриядерных процессов в

пространстве ядра

1.1.1.1. Ядрышко

1.1.1.2. Кластеры интерхроматиновых гранул

1.1.1.3. Ядерные РМЬ-тельца

1.1.1.4. Ядерные тельца, содержащие белки группы Ро1усошЬ

1.1.1.5. Ядерные тельца, содержащие белок 5 3 ВР1

1.1.1.6. Тельца, содержащие факторы процессинга 3 ’ -конца РНК
1.1.2. Динамика внутриядерных компонентов
1.1.3. Самоорганизация внутриядерных доменов
1.2. Тельца Кахала
1.2.1. Коилин и тельца Кахала
1.2.2. Молекулярный состав и модульная организация телец Кахала
1.2.2.1. Факторы сплайсинга РНК
1.2.2.2. Малые РНК ядрышек и РНК, специфичные для телец Кахала
1.2.2.3. Дополнительные компоненты телец Кахала
1.2.2.4. Участие коилина в поддержании целостности телец Кахала
1.2.3. Динамика телец Кахала
1.3. Тельца гистонового локуса
1.3.1. Молекулярный состав телец гистонового локуса в
соматических клетках
1.3.2. Механизм формирования телец гистопового локуса
1.3.3. Взаимоотношения телец гистонового локуса с
тельцами Кахала
1.4. Внутриядерные структуры ооцитов
1.4.1. Типы оогенеза

1.4.2. Ядро растущего ооцита
1.4.2.1. Транскрипционно неактивный ядерный аппарат
1.4.2.2. Транскрипционно активный ядерный аппарат
1.4.2.3. Внутриядерные тельца в ооцитах птиц
2. Материалы и методика
2.1. Объекты и материал исследования
2.2. Микрохирургическое выделение ядер из ооцитов птиц
2.3. Приготовление препаратов внутриядерных структур из
ооцитов птиц и амфибий
2.4. Иммунофлуоресцентное окрашивание целых ооцитов
2.5. Иммунофлуоресцентное окрашивание ядер ооцитов птиц
2.6. Иммунофлуоресцентное окрашивание препаратов
содержимого ядер ооцитов
2.7. Флуоресцентная гибридизация in situ
2.8. Получение белкового экстракта из ядер клеток печени голубя
2.9. Иммуноблоттинг
2.10. Флуоресцентная и фазово-контрастная микроскопия
2.11. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия Компьютерная обработка изображений и морфометрический анализ
2.12. Компьютерный анализ первичных последовательностей белков
3. Результаты
3.1. Трехмерная архитектура гигантских транскрипционно активных
ядер ооцитов голубя сизого
3.2. Экстрахромосомные «плотные шары» и «полые сферы» в ядрах ооцитов голубя содержат РНК, но не ДНК
3.3. Количество и размеры экстрахромосомных внутриядерных
телец в ооцитах голубя на стадии хромосом типа ламповых щеток
3.4. Белок коилин-маркерный компонент экстрахромосомных внутриядерных телец в ооцитах голубя

3.5. Молекулярный состав содержащих коилин сферических телец в
ядрах ооцитов голубя на стадии хромосом типа ламповых щеток
3.5.1. Экстрахромосомные содержащие коилин тельца в ядрах ооцитов голубя накапливают компоненты малых ядерных РНП, но
не фактор сплайсинга БС35
3.5.2. Экстрахромосомные содержащие коилин тельца в ядрах ооцитов голубя не эквивалентны тельцам гистонового локуса
3.5.3. Экстрахромосомные содержащие коилин тельца в ядрах ооцитов голубя не накапливают белков ядрышек
3.5.4. Другие компоненты экстрахромосомных содержащих коилин
телец в ядрах ооцитов голубя
3.6. Внутриядерные тельца в ооцитах неполовозрелых самок голубя
4. Обсуждение
4.1. Организация ядер маленьких ооцитов неполовозрелых
самок голубя
4.2. Организация ядер больших ооцитов на стадии хромосом типа ламповых щеток половозрелых самок голубя
4.2.1. Сравнение «плотных шаров» и «полых сфер» ядер ооцитов голубя
с известными содержащими коилин тельцами зародышевых пузырьков
4.2.2. Особенности модульной организации телец, содержащих коилин,
в ядрах ооцитов голубя
4.2.3. Особенности распределения телец, содержащих коилин, в пространстве ядра ооцита голубя
4.3. Заключение
Выводы
Список литературы

В ТК обнаружен важный класс малых некодирующих РНК, специфичных для телец Кахала (англ. - “small Cajal body-specific RNAs”, scaPHK). Такое название они получили благодаря тому, что накапливаются в высоких концентрациях в ТК клеток тканей животных (Darzacq et al., 2002). РНК, характерные для ТК, входят в класс мяшРНК и играют важную роль в модификации мяРНК U1, U2, U4, U5 и U12, определяя сайты метилирования рибозы или сайты формирования псевдоуридина во время окончательного созревания мяРНК (табл. 1). На основании своей последовательности и особенностей вторичной структуры все мяшРНК подразделяют на две категории: группа С/D мяшРНК и группа Н/АСА мяшРНК, которые участвуют в 2’-0-метилировании рибозы и псевдоуридинилировании соответственно. Не все scaPHK содержат и С/D-, и Н/АСА-участки и большинство из них структурно и функционально неотличимы от мяшРНК, осуществляющих направленную модификацию рРНК в ядрышке. Основным отличием мяшРНК от scaPHK является наличие у последней короткого мотива - САВ-домена (англ. -“Cajal body box”), который отвечает за локализацию данного типа РНК в ТК (Richard et al., 2003; Venteicher et al. 2009). scaPHK млекопитающих, дрозофилы и растений содержат две копии эволюционно консервативной САВ -последовательности UGAG. При искусственном добавлении САВ - домена к мяшРНК такая конструкция начинает накапливаться в ТК (Richard et al., 2003). Первой описанной scaPHK была scaPHK U85 (таблица 1), среди других также известны такие, как АСА47, АСА11, U109 и АСА57 РНК (Xie et al., 2007).
1.2.2.3. Дополнительные компоненты телец Кахала Теломераза. Еще одним РНП-комплексом, компоненты которого обнаруживаются в составе ТК, является теломераза. Теломераза обеспечивает синтез теломерных повторов в первичных и опухолевых клетках (Shay, Bacchetti, 1997). Теломераза человека состоит из трех основных субъединиц: обратной транскриптазы теломеразы, теломеразной РНК и белка дискерипа. Недавно был описан еще один голоэнзим ТСАВ1 (англ. - “telomerase Cajal body protein 1”), необходимый для функционирования теломеразы, который накапливается в ТК (Zhu et al., 2004; Venteicher et al., 2009). Истощение запаса белка TCAB1 с